Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина | Обзорные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение
 См. также

Научные статьиО некоторых спорных вопросах медико-генетического консультирования, связанных с приемом лекарственных препаратов во время беременности: Литература

(Продолжение)

W.Gotlieb и соавт. [33] изучили роль фактора некроза опухоли и гена супрессора опухоли р53. Авторы использовали технику Northern blot для определения экспрессии мессинджера р53 рибонуклеиновой кислоты в клетках рака яичников. Клетки опухоли больных после перевивания на мышах экспонировали с надосадочным слоем жидкости активированных моноцитов, Т-клеток или рекомбинантных цитокинов интерлейкина-6 и с фактором некроза опухоли альфа. В клетках рака яичников был выявлен определяемый уровень мессинджера в виде рибонуклеиновой кислоты для р53. Фактор некроза опухоли альфа вызывал значительное повышение уровня мессинджера рибонуклеиновой кислоты для р53 в клетках рака яичников, пассированных через мышей и in vitro, в то время как интерлейкин-6 такого эффекта не давал. Максимальное время индукции составляло 8 ч, эффект был дозозависимый. Фактор некроза опухоли альфа вызывал дозозависимое увеличение фрагментации ДНК. Таким образом, фактор некроза опухоли альфа вызывал активацию экспресии гена-супрессора опухоли р53 в эпителиальных клетках рака яичников. В ряде экспериментальных работ изучалась эффективность различных химиотерапевтических препаратов и препаратов-сателлитов, так или иначе оказывающих влияние на эффективность химиотерапии. Значительная часть этих работ проведена с целью подтверждения или критики ранее проведенных исследований.

Так, по данным F. Burke и соавт. [19], в эксперименте на мышах с моделью рака яичников $\gamma$-интерферон, вводимый интраперитонеально в дозах, соответствующих клиническим, в 3-6 раз увеличивал продолжительность жизни животных с множественными опухолями брюшины. В результате использования ежедневных доз, превышающих таковые при прерывистом лечении, повышалось содержание p53 протеина к 48 ч, снижался синтез ДНК и вызывался апоптоз в опухолевых клетках, что сопровождалось максимальным эффектом через 7-21 день лечения. Однако этот эффект не усиливался последующим применением препарата карбоплатин. Тем не менее, ингибитор металлопротеазы batimastat увеличивал выживаемость мышей, если назначался после интерферона. Выяснилось, что $\gamma$-интерферон обладает цитотоксичностью по отношению к эпителиальным клеткам яичников in vivo, а эффективным является интенсивное местное применение его в течение короткого времени.

R.Gibb и соавт. [32] еще раз подтвердили, что возможность достичь значительной токсичности цисплатина и таксола может быть прямо связана с индукцией апоптоза, однако исход этого лечения зависит от клеточных и генетических характеристик опухоли.

Z.Chen и соавт. [21] изучали повышение эффективности вовлечения конвертирующим ферментом семейства протеаз активности расщепленного актина в процесс апоптоза в клетках карциномы яичников человека. В этом случае раковые клетки подвергались апоптозной смерти при воздействии такими препаратами, как цисплатин и этопозид. Однако ингибиторы класса ICE/ced-3 (Z-VAD-CH2DCB и Z-EVD-CH2DCB) предупреждали или тормозили процесс апоптоза клеток OVCAR-3 на фоне химиотерапии.

По мнению A.Eliopoulos и соавт. [25], модуляция апоптоза может приводить к резистентности опухоли к химиотерапии и таким образом оказывать влияние на исход лечения. Так, причинами могут быть экзогенная экспрессия bcl-2 или повышенная чувствительность мутанта р53 к изменениям температуры в клетках яичников линии A2780, что приводит к снижению вызываемого апоптоза или к задержке медикаментозно обусловленной фазы S. Аккумуляция р53 в ответ на повреждение ДНК, вызванное различными агентами, может быть задержана и снижена bcl-2-трансфектантами.

L.Havrilesky и соавт. [34] выращивали клетки рака яичников, полученные из асцитической жидкости, в присутствии цисплатина, гидроксипероксициклофосфамида (ГПЦФ) и паклитакселя. Из клеток экстрагировали ДНК и проводили электрофорез с целью выяснить наличие апоптоза. Из 6 линий метастатических клеток в 3 (OVCA 420, 429 и 433) апоптоз не развился и в 2 (OVCAR-3, OVCA 432) он выявлен как реакция на все три препарата. В клеточной линии DOV 13 апоптоз был следствием использования ГПЦФ. У трех больных первичным раком яичников цисплатин вызвал апоптоз в одном. Обе линии клеток с мутированным геном p53 (OVCAR-3 и OVCA 432) подверглись апоптозу в ответ на воздействие всех трех химиопрепаратов, в то время как при использовании нормального гена p53 клетки только одной линии реагировали на применение ГПЦФ.

С целью повышения эффективности химиотерапии некоторые авторы предлагают применять адъюванты. Так, G.Ferrandina и соавт. [27] в эксперименте in vitro применили фенилацетат натрия с целью определения антипролиферативой активности препарата цисплатин против клеток карциномы яичников. Выяснилось, что комбинация этих двух препаратов дает дополнительный ингибирующий эффект. Авторы считают, что они первые показали эффект фенилацетата натрия в торможении роста клеток рака яичников и клеток из асцитической жидкости у больных, получивших химиотерапию. Предполагают, что молекулы этого препарата могут представить прототип нового класса компонентов с возможным терапевтическимм эффектом у больных раком яичников.

S.Bu и соавт. [18] напоминают, что до настоящего времени не ясно, является ли антиопухолевая активность прогестерона следствием индукции апоптоза в раковых и предраковых клетках яичников. Известно, что в программированной смерти клеток важную роль играют гены p53, bcl-2 и c-myc, которые могут быть вовлечены в процесс апоптоза под влиянием прогестерона. Авторы нашли, что прогестерон значительно тормозит пролиферацию клеток и вызывает апоптоз в обеих линиях тестированных клеток рака яичников. Лечение прогестероном существенно повышает экспрессию р53 в этих клетках, указывая на вовлечение р53 в вызванный прогестероном апоптоз.

Значительное число работ посвящено применению химиопрепарата цисплатина. Так, A.Fajac и соавт. [26] выявили у больных раком яичников подлинию резистентных к цисплатину клеток опухоли, что требовало увеличения дозы препарата, чтобы вызвать адекватный апоптоз. В резистентных клетках протеин р53 может инактивироваться двумя путями: мутацией или комплексацией с mdm-2 протеином. Следовательно, присутствие нефункционирующего гена р53 может быть причиной снижения эффективности вызванного цисплатином апоптоза в этих клетках.

Известно, что колонии опухолевых клеток аденокарциномы яичников в культуре в виде микросфер более резистентны к действию различных антираковых препаратов, чем в колониях в виде монослоя. Однако некоторые из них, например цисплатин, обладают эффективностью независимо от формы колоний, в отличие от таксола. Предполагается, что использование антиадгезивных препаратов может быть эффективным для преодоления резистентности таксола при лечении некоторых форм рака яичников [29].

Исследование M.Ormerod и соавт. [55] было направлено на изучение чувствительности и резистентности злокачественных клеток к цисплатину. По степени чувствительности клеток карциномы яичников к цисплатину авторы выделили три формы: чувствительные, с приобретенной и с запрограммированной резистентностью. Выявлено, что чувствительность этих 3 линий клеток к цисплатину объясняется их способностью преодолевать повреждения, наносимые препаратом ДНК, и что основной механизм гибели клеток всех 3 линий заключается в апоптозе.

Из доступных работ только одна была целенаправленно посвящена изучению токсичности химиопрепарата. Так, хорошо известна токсичность паклитакселя [22].

К работам, представляющим новые методы лечения злокачественных опухолей, можно отнести исследование R.Uslu и соавт. [67]. Авторы рекомендуют для лечения как чувствительных к химиопрепаратам, так и резистентных к ним опухолей применять CDDP - комбинацию анти-Fas-антител и медикаментов.

R.Ackerman и соавт. [15] использовали поликлональную антисыворотку, которую получали от овец после удаления яичников. Антисыворотка предназначалась против пептидов, относящихся к аминокислотам 5-17 от рецепторов мышиного гипофизарного гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ). Антипептидные антитела не связывали нативные клетки, но активно реагировали с линиями клеток рака яичников человека (OVCAR-3) вследствие чувствительности к ГнРГ. Рост клеток OVCAR-3 в культуре специфично подавлялся антипептидной сывороткой. Частично это объяснялось программированной смертью (конденсация хроматина, фрагментация ДНК) в результате воздействия вызванного антителами апоптоза. Антитела также давали цитолитический эффект за счет высвобождения лактатдегидрогеназы по отношению к клеткам OV-CAR-3 в присутствиии комплемента. Отсутствовало развитие эндометрия пассивно иммунизированных крыс. Авторы считают, что антитела, специфичные к эффекторам, могут быть использованы для лечения неоплазий яичников и матки.

J.Deshane и соавт. [23] описали новый метод разрушения онкопротеина erbB-2 с использованием метода формирования гена, кодируя внутриклеточные антитела как anti-erbB-2. Этот метод генетической интервенции позволил вызвать заметный разрушающий эффект в виде апоптоза на клетки опухоли яичников человека на фоне сверхэкспрессии erbB-2.

В одной из работ [65] фиксировано внимание на использовании гамма-излучения в терапевтических целях. В эксперименте под влиянием небольших доз гамма-излучения на монослой клеток карциномы яичников человека выявлено 30-40% клеток в статусе апоптоза [28].

В двух публикациях было уделено внимание проблеме прогнозирования эффективности лечения. При вычислении индекса апоптоза путем деления числа апоптозных клеток на 1000 клеток опухоли F.Yamasaki и соавт. [69] установили его повышение в 71 препарате карциномы хирургически резецированных яичников. Высокий показатель индекса (i2,8) коррелировал с высокиммитотическим индексом (р=0,05), гистологически высокой стадией опухоли (p=0,018) и короткой продолжительностью жизни (p=0,017). Наблюдалась также обратная зависимость между индексом и экспрессией bcl-2 протеина (p=0,007). При плоскоклеточном раке яичников прогностическими показателями являлись только клиническая стадия (p=0,0395) и митотический индекс (p=0,0387). Авторы полагают, что индекс апоптоза, не являясь независимым прогностическим фактором, может учитываться при прогнозировании выживаемости пациентов при раке яичников. Согласно данным J.Diebold и соавт. [24], анализ послеоперационного течения у 110 больных показал, что выживаемость зависит от гистологического типа и степени развития опухоли (p=0,0037 и 0,0143 соответственно), стадии (p=0,0001), отсутствия или наличия резидуальной ткани опухоли в области операции (p=0,001). При положительных показателях bcl-2 исход лечения был лучше, чем при положительных показателях p53 и отрицательных bcl-2 (p=0,0443).

Заболевания матки

При проведении иммунобиологических исследований у больных с патологией матки в последнее время прибегают к таким методам, как иммунохимический. Однако Y.Kuwashima и соавт. [48] считают, что иммунохимический метод не всегда позволяет идентифицировать апоптозную фрагментацию ДНК, по крайней мере при аденокарциноме эндометрия у человека.

Большинство касающихся апоптоза исследований посвящено злокачественным неопластическим процессам эндометрия. Исключение составляет работа S.Huang и соавт. [39], которые изучали эффективность лечения лейомиомы матки с помощью ГнРГ. При обследовании 59 больных у большинства из них выявлена значительная экспрессия ядерного антигена пролиферирующих клеток, которая под влиянием ГнРГ увеличилась в еще большей степени (р=0,0004). Апоптоз в клетках лейомиомы развивался спонтанно и независимо от применения гормональной терапии, однако лечение вызвало значительное повышение плотности микрососудов. В другой работе, согласно данным T. Higashijima и соавт. [38], гормонотерапия ГнРГ уменьшает размеры клеток лейомиомы матки и вызывает значительную гиалиновую дегенерацию опухолевой ткани. Экспрессия антигена Le(Y) выявлена у 18 (69,3%) из 26 леченых больных (p<0,02) и у 12 (80%) из 15 женщин в постменопаузе (p<0,05), но только у 8 (40%) из 20 больных в предменопаузе, которые не получали гормонотерапии. Апоптозные клетки выявили у 14 (53,8%) пациенток в группе леченых, у 10 (50%) - в группе нелеченых и у 12 (80%) женщин в постменопаузе. Авторы полагают, что индукция апоптоза может быть вызвана в результате применения ГнРГ.

В эксперименте L. Karlsson и соавт. [42] пересаживали клетки умеренно дифференцированной карциномы эндометрия человека мышам для изучения влияния на нее эстрадиола. В ответ на гормонотерапию снижалась концентрация фактора некроза опухоли. Объем опухолей у животных, леченных эстрадиолом, в 2 раза увеличивался в сроки 5,4-16 дней. Гистологически клетки опухоли на фоне гормонотерапии были лучше дифференцированны, увеличилось число клеток с признаками апоптоза. Таким образом, полученные данные позволяют утверждать, что повышенная активность апоптоза является ответом на гормонотерапию.

По данным И.С. Метелицы [4], у больных раком тела матки лимфоциты экспрессировали Fas (Apo-1/CD95) антиген на уровне, характерном для здоровых доноров и больных раком яичников (27,7 4,4%), тем не менее у 44,4% обследованных выявлен низкий уровень экспрессии антигена.

Проблеме гормонотерапии рака матки посвящена работа M.Saegusa и соавт. [57]. Авторы нашли, что экспрессия bcl-2 может играть центральную роль в ингибиции апоптоза при раке эндометрия, в частности с тубулярными компонентами, что, возможно, связано скорее с использованием прогестерона, чем эстрогена. Изменение склонности клеток к апоптозу в результате гормонотерапии может влиять на процессы дифференциации клеток и их потенцию к росту опухолевой ткани.

В близкой по тематике работе Y.Kuwashima и соавт. [47] с помощью иммунохимического метода определяли продукты bcl-2 и фрагментацию ДНК в клетках эндометрия во время апоптоза с целью установления корреляции между двумя противонаправленными процессами при солидной опухоли человека. В результате была найдена обратная корреляционная зависимость, однако авторы убедились, что экспрессия bcl-2 не всегда блокирует апоптоз. В очередной работе Y. Kuwashima и соавт. [49] исследовали фрагментацию ДНК в тканях аденокарциномы эндометрия человека. Согласно полученным данным, апоптозная и независимая фрагментация ДНК продуктами bcl-2 является неспецифической по отношению к клеточной пролиферации. Более того, результаты указывают на изменение регуляции процесса гибели клеток солидной опухоли человека in vivo.

D.Kleinman и соавт. [45] изучали влияние антагониста ГнРГ SB-75 и агониста бусерелина (buserelin) на пролиферацию раковых клеток эндометрия.

Две линии клеток эндометрия человека, которые различались по гистологическому субтипу и содержанию рецепторов эстрогена, обрабатывали аналогом ГнРГ. Определяли количество жизнеспособных клеток, параметры клеточного цикла и активность апоптозного процесса. Выявлено, что рост клеток Ишикава подавлялся препаратом SB-75. Эстрадиол (17b) частично нейтрализовал ингибиторный эффект SB-75. На рост клеток линии HEC-1A антагонист не влиял. Клетки линий эндометриального рака не обнаружили выраженной чувствительности к агонисту бусерелину. Десятикратная концентрация агониста ГнРГ не снижала ингибирующего влияния антагониста на рост клеток. Ингибиция роста не была связана с какими-либо изменениями в параметрах циклов клеток, но была связана с индукцией апоптоза. Таким образом, антагонист ГнРГ SB-75 прямо ингибирует рост некоторых раковых клеток эндометрия человека и, следовательно, может использоваться для лечения злокачественных опухолей.

M.Heatley [36, 37] поставил цель выяснить, возможно ли определение апоптозного индекса в препаратах ампутированной матки и реально ли установить какую-либо связь между ним и степенью и стадией опухоли. Апоптозный индекс автор вычислял как процентное соотношение морфологически идентифицированных апоптозных клеток и апоптозных тел в 3000 клеток опухоли. В целом наиболее высокий (6,3%) апоптический индекс выявлен у пациенток с III степенью процесса, в то время как этот показатель был равен 2,7% (p<0,0001) у больных с I и II степенью. Наиболее высоким (9,7%) индекс был у больных с недифференцированной карциномой. Вместе с тем хотя высокий апоптический индекс является плохим прогностическим признаком для больных карциномой эндометрия, этот показатель не может быть критерием для отдельных подгрупп больных карциномой.

Таким образом, анализ результатов проведенных исследований позволяет сделать несколько выводов. Для лечения больных с опухолями матки и, в частности эндометрия, целесообразно применение гормонотерапии такими препаратами, как ГнРГ, прогестерон и эстрадиол. Гормонотерапия оказывает прямое или опосредованное воздействие на процессы апоптоза. Эффективность лечения можно оценивать путем подсчета относительного содержания клеток, подвергшихся апоптозу, или апоптозных тел.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования