Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Посмотрите новые поступления ... Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение
Впервые обнаружены штаммы P.aeruginosa, гидролизующие эскулин. Они составляют 17,1 2,0% штаммов P.aeruginosa: 60 штаммов из 352, выделенных из клинического материала в лечебных учреждениях Санкт-Петербурга. Гидролиз эскулина определяли микрообъемным методом в планшетах, результаты учитывали через 3 ч инкубации при 37 њС. Эскулинпозитивные штаммы обладают признаками биовара: широко распространены, имеют другие характерные свойства (отсутствие запаха триметиламина и "радужного лизиса" колоний), стабильны по признаку гидролиза эскулина у повторных штаммов от больных и при хранении культуры. Типовой штамм биовара esculinolytica депонирован в коллекцию типовых культур Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии под номером P.aeruginosa ARRIAM 64-A. При изучении диско-диффузионным методом чувствительности к антисинегнойным антибиотикам установлено, что большинство штаммов эскулинпозитивного биовара чувствительны к имипенему (86,6%), амикацину (75,0%), цефтазидиму (65,0%), меропенему (60,0%), азтреонаму (51,6%). Значительно реже встречаются штаммы, чувствительные к азлоциллину (33,3%), нетилмицину (33,3%), пиперациллину (26,6%), цефтриаксону (18,3%). Только единичные штаммы чувствительны к ципрофлоксацину (8,3%), гентамицину (3,4%), цефоперазону (1,7%), карбенициллину (1,7%). Полученные данные могут быть использованы при выборе эффективных антибиотиков еще до изучения антибиотикочувствительности выделенного штамма только на основании признака гидролиза эскулина, который определяется экспресс-методом в течение трех часов.

Ключевые слова:

Pseudomonas aeruginosa, эскулин, биовар, антибиотикочувствительность.

В руководстве по систематике бактерий Берджи [1], определителе бактерий Берджи [2], руководствах по клинической микробиологии и монографиях [3-7] указывается, что бактерии Pseudomonas aeruginosa не гидролизуют эскулин.

Нами в 97-98-е годы впервые выявлены среди клинических изолятов штаммы синегнойной палочки, гидролизующие эскулин. Целью данного исследования является изучение чувствительности эскулинпозитивных штаммов к антисинегнойным антибиотикам и описание признаков P.aeruginosa биовара esculinolytica.

Материал и методы

Изучено 352 штамма P.aeruginosa, выделенных в 1998-1999 гг. в стационарах Военно-медицинской академии и межрайонной клинико-бактериологической лаборатории N2 Санкт-Петербурга. Из них 110 штаммов выделены из мочи больных урологических стационаров и 242 штамма из клинического материала (крови, отделяемого ран, ликвора, мокроты) стационаров хирургического профиля. В качестве контрольных использовали штаммы P.aeruginosa АТСС 10145 и АТСС 27853.

Чистые культуры каждого штамма P.aeruginosa получали путем трехкратных пересевов из единичных колоний на питательном агаре с интервалами 24 ч при 37 њС. Морфологию бактерий изучали микроскопией мазков, окрашенных по Граму, подвижность - фазово-контрастной микроскопией. Культуральные свойства исследовали на питательном агаре из гидролизата рыбы (НПО "Питательные среды", Махачкала) и питательном агаре с кровью человека. Продукцию пиоцианина определяли на среде Кинг А ("Bio-Merieux"), продукцию пиовердина (флюоресцеина) - на среде Кинг В ("Bio-Merieux"). Наличие прочих пигментов, феномена "радужного лизиса" колоний, запаха триметиламина изучали при росте бактерий на питательном агаре. Рост P.aeruginosa на среде "ПСЕВДОМОНАС АПС" изучали при 42 њС в течение 24 ч [8]. Селективное подавление роста ионами бария испытывали на питательном агаре с хлоридом бария [9]. Цитохромоксидазу бактерий определяли по Ковачу реактивом диметил-пара-фенилендиамином; О/Ф тест с глюкозой - на среде Хью-Лейфсона в течение 1-4 суток. Аргининдигидролазу, лизин-декарбоксилазу, орнитиндекарбоксилазу, триптофандезаминазу, нитратредуктазу изучали микрообъемным методом в планшетах [10, 11]. Окисление углеводов и спиртов исследовали на среде Хью-Лейфсона в течение 1-4 суток при 37 њС. Лецитиназу определяли на питательном агаре с куриным желтком, гемолизины - на 5% кровяном агаре при экспозиции 24-28 ч при 37 њС. Трофические потребности в отношении 24 источников углерода изучали у 10 эскулинпозитивных штаммов синегнойной палочки и двух контрольных культур АТСС 10145 и АТСС 27853. Исследования проводили на минимальном агаре с минеральным источником азота и испытуемым субстратом углерода в концентрации 0,2% [12]. Результаты учитывали через 1-5 суток инкубации при 37 њС.

Гидролиз эскулина изучали микрообъемным методом. Использовали питательную среду нашей модификации: эскулин ("Merck") - 0,1 г; пептон ферментативный - 1 г; цитрат натрия - 0,1 г; 10% водный раствор хлорного железа (FeCl3ћ6H2O) - 0,1 мл; дистиллированная вода - 100 мл.

Стерилизация среды при 121 њС в течение 20 мин. Постановка теста: в лунку стерильного полимерного планшета вносили 100 мкл среды с эскулином, затем одну полную петлю агаровой культуры испытуемых бактерий и размешивали петлей. Контроль: 100 мкл среды с эскулином в лунке без посева культуры (один контроль на группу испытуемых штаммов). Посевы помещали в термостат при температуре 37 њС. Результат учитывали через 3 ч. При положительном результате (гидролиз эскулина) на дне лунки наблюдается осадок интенсивного черного цвета и среда окрашена в черно-коричневый цвет, при отрицательном результате среда в лунке сохраняет исходную светлую окраску. В сравнительных контрольных исследованиях изучали гидролиз эскулина в лунках с эскулином планшета коммерческой тест-системы "Enterotest 2" ("Lachema", Чехия). При этом вносили в лунки по 100 мкл 0,85% раствора хлорида натрия, затем по одной полной петле агаровой культуры исследуемых бактерий, инкубировали при 37 њС, результаты учитывали через 3 ч.

Чувствительность синегнойных палочек к антибиотикам изучали диско-диффузионным методом [6]. Использовали наборы дисков с антибиотиками производства Научно-исследовательского центра фармакотерапии (Санкт-Петербург).

Стабильность признака гидролиза эскулина у P.aeruginosa изучали у эскулинпозитивных культур, хранящихся в полужидком агаре под слоем вазелинового масла при 20 њС в течение 6 и 12 мес, а также у культур, выделенных повторно у больных.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования