Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Посмотрите новые поступления ... Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина | Курсы лекций
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение
Изучено влияние фторхинолонов - ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина на процесс адгезии у штаммов Y.pseudotuberculosis. Установлено, что данные препараты влияют на адгезивные свойства Y.pseudotuberculosis по-разному (от снижения до увеличения), данный эффект наблюдается и у близкородственных штаммов микроба. У штаммов Y.pseudotuberculosis, недоминирующих в поликлональной популяции микроба, отмечается снижение адгезивных свойств под действием фторхинолонов. У штаммов из числа доминирующих клонов действие данных препаратов на адгезивный процесс неоднозначно.

Ключевые слова:

адгезия, Yersinia pseudotuberculosis, фторхинолоны, доминирующий клон, недоминирующий клон.

В настоящее время установлено, что популяции Yersinia pseudotuberculosis серовара 1b имеют клональную структуру [1]. В большинстве регионов России они поликлональны. Кроме того, установлено наличие доминирующего клона, что является объективной характеристикой поликлональной популяции возбудителя. Было высказано мнение, что инфицирование человека вызывается совокупностью различных клонов одного вида возбудителя, представленных в инфицирующей популяции. В процессе развития поликлональной инфекции происходит селективный отбор доминирующего клона [2].

В то же время необходимо отметить, что одним из необходимых факторов существования патогенных бактерий в организме человека является адгезия [3, 4]. Функция распознавания, прикрепление микробов к клеткам макроорганизма детерминируется адгезинами - структурными единицами клеточной поверхности микроба [3, 4, 5]. В настоящее время появились работы, изучающие адгезию и адгезины различных микроорганизмов. В частности, в последние годы фимбрии обнаружены у некоторых штаммов псевдотуберкулезного микроба, выращенных при разных температурах [6, 7].

Между тем в работах последних лет обращается внимание на изучение процессов прерывания адгезии у микроорганизмов [4, 5, 8]. Обнаружено, что адгезины микробов чувствительны к влиянию антибиотиков при выращивании бактерий в питательной среде, содержащей суббактериостатические концентрации антибиотика [8].

Анализ литературных данных по фторхинолонам показал, что субингибирующие концентрации данных химиопрепаратов уменьшают адгезию ряда микроорганизмов (Е.соli, Streptococcus spp. и S.aureus) [9, 10].

В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение влияния некоторых препаратов группы фторхинолонов (ципрофлоксацина, пефлоксацина, норфлоксацина) на процесс адгезии к клеткам макроорганизма у штаммов, доминирующих или недоминирующих в поликлональной популяции Y.pseudotuberculosis.

Материал и методы

Исследования проведены на 34 штаммах Y.pseudotuberculosis серовариантов 1а, 1b, 3 и 4b, имеющих различный плазмидный спектр и выделенных в различных регионах Российской Федерации (табл. 1).

Таблица 1. Штаммы Y.pseudotuberculosis, использованные в экспериментах по прерыванию адгезии фторхинолонами
Серовар Спектр плазмид в МДа Kоличество штаммов Место выделения
45 4 Чукотка
1b 82:48 7 Якутия
82:48:3,5:2,7 8 г. Москва
82:48:3,5 8 г. Москва
48:4,4 1 Kемеровская обл.
82:48:2,7 1 Kемеровская обл.
82:48:37:34:2,3 1 Kемеровская обл.
82:48:37:28 1 Kемеровская обл.
82:48:40:36 1 Kемеровская обл.
3 45 1 г. Владивосток
4b 45 1 Приморский край

Исследуемые препараты группы фторхинолонов: ципрофлоксацин (субстанция, активность 85%), норфлоксацин (субстанция, активность 99,5%), пефлоксацин (субстанция, активность на сухое вещество 78,4%). Данные препараты синтезированы в Уральском политехническом университете.

Изучение влияния фторхинолонов на адгезивный процесс проводили по методике, предложенной В.И. Брилис с соавт. [11]. В качестве буфера использовали 0,15 М раствор фосфата натрия, приготовленный на изотоническом растворе хлорида натрия (рН 7,2). Готовили суточные культуры штаммов Y.pseudotuberculosis в разведении 109 микр. кл/мл по оптическому стандарту мутности производства ГИСК им. Л.А Тарасевича. Клеточным субстратом служили нативные эритроциты человека О (I) группы Rh (+) в концентрации 0,5%, предварительно дважды отмытые буферным раствором путем центрифугирования (300-1000 об/мин). Концентрация антибиотиков составляла 1 мг/мл. Адгезивные свойства оценивали под световым микроскопом с вычислением среднего показателя адгезии (СПА) - среднего количество микробов, прикрепившихся к 1 эритроциту, при подсчете не менее 25 эритроцитов, учитывая не более 5 эритроцитов в одном поле зрения.

Результаты исследований

Исследования показали, что все изучаемые препараты в большей или меньшей степени влияют на адгезию Y.pseudotuberculosis к клеткам макроорганизма.

Более выраженный ингибирующий эффект отмечен у ципрофлоксацина и норфлоксацина. Так, адгезия Y.pseudotuberculosis под действием ципрофлоксацина снизилась в среднем до 63,95%, норфлоксацина до 65,5% и пефлоксацина до 73,64% от исходного уровня.

Однако действие данных препаратов неоднозначно для изученных бактерий псевдотуберкулеза. Снижение средних показателей адгезии под влиянием ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина обнаружено у 19 штаммов. Вместе с тем для 8 штаммов было установлено повышение средних показателей адгезии, а для 7 штаммов - снижение или повышение адгезивных свойств под влиянием одного из трех фторхинолонов.

Мы сопоставили наши результаты по ингибированию адгезии Y.pseudotuberculosis под действием ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина в соответствии с тем, является ли тот или иной штамм доминирующим или недоминирующим в популяции микроба. В результате изучения определились две группы штаммов Y.pseudotuberculosis (табл. 2). В первой группе (16 штаммов) оказались штаммы, недоминирующие в поликлональной популяции микроба, во вторую группу попали 18 штаммов, которые доминировали в изучаемой популяции бактерий.

Таблица 2. Влияние фторхинолонов на средние показатели адгезии (СПА) штаммов Y.pseudotuberculosis в зависимости от доминирования клона
Показатели СПА у недоминирующих штаммов Y.pseudotuberculosis, (n=16) СПА у доминирующих штаммов Y.pseudotuberculosis, (n=18)
Kонтроль ЦФЛ ПФЛ НФЛ Kонтроль ЦФЛ ПФЛ НФЛ
М m 3,0 0,3 1,42 0,28 1,44 0,31 1,085 0,19 1,49 0,19 2,4 0,16 2,61 0,39 2,85 0,23
p   <0,01 <0,01 <0,01   <0,01 <0,05 <0,01
Примечание. Здесь и в табл. 3, 4: ЦФЛ - ципрофлоксацин, ПФЛ - пефлоксацин, НФЛ - норфлоксацин.

Как видно из табл. 2, штаммы, недоминировавшие в популяции, под действием фторхинолонов снижали адгезивную активность.

В большей степени снижение адгезивных свойств у штаммов Y.pseudotuberculosis отмечалось под действием норфлоксацина, СПА для ципрофлоксацина и пефлоксацина было почти одинаковым. В то же время у штаммов, доминировавших в поликлональной популяции, средний показатель адгезии к эритроцитам, наоборот, повышался. Это характерно для действия всех трех изученных фторхинолонов.

При более детальном рассмотрении каждой группы в отдельности установлено, что в первой группе находились четыре штамма Y.pseudotuberculosis серовара 1а, одиннадцать штаммов серовара 1b и один штамм серовара 3. У штаммов серовара 1b и 3, относящиеся к недоминирующим, под влиянием трех фторхинолонов отмечалось снижение адгезивности у микроорганизмов (табл. 3).

Таблица 3. Влияние фторхинолонов на средние показатели адгезии у штаммов Y.pseudotuberculosis сероваров 1b и 3, недоминировавших в поликлональной популяции
Серовар, спектр плазмид в МДа Номер штамма Kонтроль (без фторхинолона) ЦФЛ ПФЛ НФЛ
1b - 82:48:3,5 Н-406 3,12 1,07 0,78 0,31
Н-407 1,74 1,07 0,51 0,9
Н-408 1,98 0,65 0,68 0,46
Н-409 2,08 1,48 0,56 0,73
Н-2538 4,12 1,16 0 0,86
Н-2539 1,55 0,76 0,66 0,69
1b - 82:48:37:28 Н-224 3,45 1,66 1,76 0,33
1b - 82:48:40:36 Н-1266 4,19 0,66 0,62 0,97
1b - 82:48:37:34:2,3 Н-335 1,69 0,65 0,5 1,07
3-45 Н-4052 2,45 1,15 1,07 0,87
1b - 48:4,4 Н-3887 2,14 1,18 0,6 0,87
1b - 82:48:2,7 Н-3900 3,63 1,05 1,97 1,18
1а - 45 N 489-907 5,23 0,94 2,44 3,15
N 488-825 4,16 1,2 4,81 2,26
N 496-1014 4,76 5,13 2,88 0,69
N 995-500 1,78 3,0 1,82 2,02

Неоднозначные результаты получены при исследовании четырех штаммов Y.pseudotuberculosis серовара 1а с особым вариантом плазмиды вирулентности (REAP - тип А), которые выделены только на Чукотке и не обнаружены в других районах мира [12]. Под влиянием ципрофлоксацина, пефлоксацина и норфлоксацина у близкородственных штаммов данного серовара имела место вариабельность адгезивных свойств. Снижение адгезии под влиянием всех трех фторхинолонов обнаружено только у одного штамма (N 489-907). Более выраженным он был под действием ципрофлоксацина, средний показатель адгезии микроорганизмов этого штамма по сравнению с контролем снизился в 5,6 раза. Напротив, все три фторхинолона увеличивали эффект адгезивности штамма N 995-500. Что касается штамма N 488-825, то эффект ингибирования адгезии наблюдался под влиянием только ципрофлоксацина и норфлоксацина (в 1,2 и 2,3 раза соответственно по сравнению с контролем). Пефлоксацин же, напротив, усиливал адгезию данного микроба на клетках. Штамм N 496-1014 также проявлял себя в этом эксперименте по-разному. Все три химиопрепарата изменяли его адгезивные свойства - ципрофлоксацин в 1,1 раза повышал, а норфлоксацин и пефлоксацин снижали их соответственно в 6,9 и 1,6 раза. Следовательно, в пределах данного серовара ципрофлоксацин, пефлоксацин и норфлоксацин неодинаково влияют на адгезивные свойства микроорганизмов.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования