Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   BOAI: наука должна быть открытой Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина >> Лабораторная и функциональная диагностика | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение
 См. также

Научные статьиАномалии половых хромосом при нарушении репродуктивной функции у мужчин: Литература

Научные статьиАномалии половых хромосом при нарушении репродуктивной функции у мужчин: (1)

Научные статьиНеобычное проявление синдрома Клайнфелтера у мальчика 1,5 лет: молекулярно-цитогенетическая диагностика мозаичной формы полисомии хромосомы Х: Литература

Научные статьиДисомия хромосом в половых клетках мужчин при нарушении сперматогенеза: Литература

Научные статьиУровень нерасхождения хромосом на разных стадиях развития мужских половых клеток человека: Литература

Молекулярно-цитогенетическая диагностика хромосомных аномалий у супружеских пар с нарушением репродуктивной функции

С.Г. Ворсанова, А.К. Берешева, Л.З. Казанцева, И.А. Демидова, В.О. Шаронин, И.В. Соловьев, Ю.Б. Юров

Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ, Научный центр психического здоровья РАМН, Москва.

В начало...


(Окончание)

Таблица 1. Цитогенетическая и молекулярно-цитогенетическая диагностика хромосомных аномалий, обнаруженных у супружеских пар с НРФ
N

п/п

Показания к проведению цитогенетической диагностики Цитогенетический диагноз Показания к проведению молекулярной цитогенетической диагностики Молекулярно-цитогенетический диагноз
1 CA 47, XY,+mar Установление происхождения маркерной хромосомы 47,XY,+mar.ish der(Y) (q12) (gen-s-Y-class+)
2 ЗПМР, MAP ВПР у ребенка 47,XX,+mar   47,XX,+mar.ish13q11.1der(21) (q11.1)(alphaR1-6+)
3 ЗПМР, МВПР у ребенка 47,XX,+mar/46,XX   47,XX,+mar.ish13q11.1der(21) (q11.1) (alphaR1-6+) [20]/46,XX.ish13q11.1,21q11.1 (alphaR1 -6х4)[80]
4 ЗПМР, MAP у 2 детей 47,XY,+mar/46,XY   47,ХХ,+mar.ish der(X)(q11.1) (pYAM10-40+)[15]/46,XY.ishXq11.1 (pYAM10-40х1) [85]
5 ЗПМР, МВПР у 2 детей 47,ХХ,+mar/46,ХХ   47,ХХ,+mar.ish der(X)(q11.1) (pYAM10-40+)[18]/46,XX.ishXq11.1 (pYAM10-40х2) [82]
6 MAP, ЗПМР у ребенка 45,XX.dict (15; 18)

(15qter->15p11::

18p11->18qter)

Уточнение точек разрыва 45,XX, dic t(15;18)(p11;p11). isht(15;18)(р11;р11)(рРD18г2,pYAM3-86г2,PAC36.15.Gх2)

нет потери материала хромосом

7 MAP, ЗПМР у ребенка 46,XX,t(4;7)

(4q ter->4pter::

7q21 ->7qter;

7pter->7q21)

  46,ХХ, t(4;7) (4qter->4p16::7q21 -> 7qter; 7pter->7q21).isht(4;7) (p16;q21) (PAC14.24.1х2, P AC170.4.Eх2)
8 ЗПМР, MAP у ребенка 46,XX,add(22) (р13) Определение происхождения дополнительного материала 46,XX,add(22)(p13).ishdup22(p13) (cos13-36+)add(22)(q11.1q11.1q13. 3) (MCG14-22х2; cosB103х2;pPD9х2; PAC90.14.Bх2)
9 MAP, низкий рост у ребенка 45,Х/46,XX Выявление мозаицизма гоносом nuc ish Xq11 (pYAM10-40х1) [11] /nuc ish Xq11 (pYAM10-40х2) [100]
10 MAP, низкий рост у ребенка 45,Х/46,XX   nuc ish Xq11 (pYAM10-40х1) [12]

/nuc ish Xq11 (pYAM10-40х2) [88]

11 ЗПМР, MAP МВПР у ребенка 45,Х/46,ХХ   nuc ish Xq11 (pYAM10-40х3) [5]

/ nuc ish Xq11 (pYAM10-40х1) [10]

/ nuc ish Xq11 (pYAM10-40х2) [100]

12 ЗПМР, MAP у ребенка 45,Х/46,Х,i(Х)

(qter->q10::q10

->qter)/46,XX

  45,X.ish Xq11 (pYAM10-40х1)[5]/ 46,X,i(X)(q10).ishi(X)(q11) (pYAM10-40+), [10] /46,XX.ishXq11 (pYAM10-40х2) [85]
13 CA 47,ХХХ/46,ХХ   nuc ish Xq11 (pYAM10-40х3) [12]

/nuc ish Xq11 (pYAM10-40х2) [100]

14 ЗПМР, MAP у ребенка 47,ХХХ/46,ХХ   nuc ish Xq11 (pYAM10-40х3) [15]

/nuc ish Xq11 (pYAM10-40х2) [125]

15 ЗПМР, МВПР у ребенка 47,XXY/46,XY   nuc ish Xq11 (pYAM10-40х2)[14]

/nuc ishXq11 (pYAM10-40х1)[100]

Примечание. СА - спонтанные аборты.

Следует отметить, что цитогенетическая постановка диагноза была затруднительна также в случаях мозаицизма анеуплоидий половых хромосом, который обнаружен у 14 индивидуумов. Мозаичные формы, как правило, создают большие трудности при идентификации патологии, так как незначительный клон аномальных клеток может быть утрачен на одном из этапов цитогенетического исследования. Своевременная идентификация мозаицизма по анеуплоидии гоносом (особенно с небольшим числом аномальных клеток) очень важна, поскольку у носителей гоносомного мозаицизма, как правило, сохранена способность воспроизводить потомство. В нашем исследовании мозаичные формы в основном были представлены двумя клонами клеток - нормальным и аномальным, у некоторых индивидуумов было обнаружено и три клона клеток (см. табл. 1, N 11). Мозаицизм выявлен с помощью методов традиционного цитогенетического анализа у 7 индивидуумов, а 7 пациентам диагноз мозаицизма поставлен с помощью молекулярно-цитогенетической диагностики, причем в одном из них была обнаружена изохромосома Xq (см. табл. 1, N 12). Следует отметить, что в диагностике мозаицизма можно использовать для анализа и интерфазные клетки. В представленных случаях использовался как интерфазный, так и метафазный анализ, результаты которых были идентичны. Таким образом, на основании интерфазного и метафазного анализов хромосом после молекулярной гибридизации поставлены диагнозы мозаицизма в 7 случаях (см. табл. 1, N 9-15). "Скрытый" аномальный клон клеток обнаружен в минимальном проценте (до 15).

Диагностика маркерных хромосом методами цитогенетического анализа оказалась также малоинформативной. Маркерные хромосомы представляли собой добавочный хромосомный материал в виде акроцентрической или метацентрической хромосомы с постоянным присутствием околоцентромерного гетерохроматина и центромеры. Использование клонированных последовательностей ДНК (ДНК-зондов) при гибридизации нуклеиновых кислот in situ позволило определить происхождение, т.е. состав маркерных хромосом (см. табл. 1, N 1-5). Как видно из табл. 1, маркерные хромосомы, обнаруженные у индивидуумов, были дериватом хромосом 21, X, Y.

Более чем у 1/5 обследованных супругов - у 127 (22%) в результате цитогенетического исследования были выявлены хромосомные варианты (1qh+, 9qh+, 9phqh, 14cenh+, 15cenh+, 16qh+, 17ps, 21cenh+, 22cenh+, Yqh+), связанные с увеличением гетерохроматиновых районов хромосом или инверсией околоцентромерного гетерохроматина. Наиболее часто (13,8%) встречались варианты 1qh+, 9qh+, 16qh+ и Yqh+, что существенно отличалось от их частоты в нормальной популяции (1,6%) [21]. При молекулярно-цитогенетическом изучении экстремального варианта хромосомы 1 используя ДНК-пробы на "классическую" сателлитную и альфа-сателлитную ДНК (ДНК-пробы pUС 1.77 и $\alpha$R1-12 соответственно) было показано, что увеличение размеров гетерохроматинового района хромосом связано с повышенным содержанием числа копий "классической" сателлитной ДНК, причем эти два различных типа повторяющихся ДНК варьируют независимо друг от друга. Влияние экстремальных вариантов хромосом 1, 9, 16 и Y, обнаруживаемых у супружеских пар, на репродуктивную функцию, в результате нарушения которой могут происходить негативные события в семье, требует дальнейшего изучения.

В литературе имеются сообщения о повышенной частоте хромосомной нестабильности (5,5%) у супружеских пар с повторными спонтанными абортами [15], результаты наших исследований не подтверждают эти данные.

Выводы

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют прежде всего о большом значении цитогенетической и молекулярно-цитогенетической диагностики в практике генетического консультирования.

Цитогенетическая диагностика супружеских пар с НРФ позволила выделить группу индивидуумов, нуждающихся в молекулярно-цитогенетических методах исследования. Выявлено, что более чем в 40% случаев (15 из 35 пациентов) необходимо проведение молекулярно-цитогенетической диагностики.

Полученные данные показывают, что молекулярно-цитогенетическая диагностика при генетическом консультировании супружеских пар с НРФ необходима: 1) для идентификации хромосомных аномалий после малоэффективной классической цитогенетической диагностики (семейные структурные сбалансированные перестройки хромосом, мозаицизм гоносом, маркерные хромосомы); 2) для определения нескольких хромосомных анеуплоидий с помощью FISH при применении ДНК-проб различной хромосомной специфичности; 3) при исследовании хромосомных вариантов с целью изучения возможных корреляций их экстремальности с нарушением репродуктивной функции, т.е. применяя молекулярно-цитогенетические методы, можно идентифицировать и изучить весь спектр хромосомных аберраций, встречаемый у супружеских пар с НРФ.

Своевременная и точная диагностика хромосомных аномалий у супружеских пар с НРФ повышает эффективность генетического консультирования и пренатальной диагностики и, следовательно, позволяет предупредить распространение таких социально значимых болезней, как хромосомные синдромы, в семье и обществе.

Проблемы репродукции, N4-1998, с.41-46

Литература

1. Loan D., Dumitrii J., Museteanu P., Ioanitic D., Pop Т., Maximilian C. Cytogenetic investigation in 300 couples with recurrent fetal wastage. Rev roum med Endocrinol 1987; 25: 3: 145-148.

2. Ворсанова С.Г., Казанцева Л.З., Берешева А.К., Демидова И.А. Результаты молекулярно-цитогенетической диагностики супружеских пар с нарушением репродуктивной функции при медико-генетическом консультировании. Респ. сборник научных трудов "Молекулярная диагностика наследственных болезней и медико-генетическое консультирование" М 1995; 124-131.

3. Vorsanova S.G., Beresheva A.K., Demidova I.A., Kasantseva L.Z., Kolotii A.D., Soloviev I.V., Malet P., Yurov Yu.B. Molecular-cytogenetic diagnosis in genetic counselling of couples with failure of reproductive function. Cytogenetics and Cell Genetics 1997; 77: 1-2.

4. Козлова С.И., Прытков А.Н. Методика проведения медико-генетического консультирования (методические рекомендации). М/ 1981; 5-6.

5. Hungerford D.A. Leucocytes cultured from small inocul of whole blood and the preparation of metaphase chromosomes by treatment with hypotonic KCl. Stain Techn 1955; 40: 333-338.

6. Chandler M.E., Yunis J.J. A high resolution in situ hybridisation technique for the direct visualisation of labelled G-banded early metaphase and prophase chromosomes. Cytogenet Cell Genet 1978; 22: 352-356.

7. Юров Ю.Б. Оптимизация условий гибридизации клонированных последовательностей ДНК in situ и дифференциального окрашивания хромосом человека. Бюлл эксперим биол и медицины 1984; 5: 595-598.

8. Soloviev I.V., Yurov Y.B., Yorsanova S.G., Malet P. Microwave activation of fluorescence in situ hybridization: a novel method for rapid chromosome detection and analysis. Focus 1994; 16: 4: 115-116.

9. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Дерягин Г.В., Соловьев И.В., Бытенская Г.А. К методике диагностики анеуплоидий при помощи гибридизации in situ: анализ интерфазных ядер. Бюл эксперим биолог и мед 1991; 10: 413-415.

10. Yurov Yu.B., Soloviev I.V., Vorsanova S.G., Marcais В., Lewis R., Roises G. High resolution milticolor fluorescence in situ hybridisation using cyanine and fluorescein dyes: ultra rapid chromosome detection by directly fluorescently-labeled alphoid DNA probes. Hum Genet 1996; 97: 390-398.

11. Юров Ю.Б., Александров И.А., Миткевич С.П., Яковлев А.Г., Рогаев Е.И., Ворсанова С.Г. Молекулярные маркеры для гетерохроматиновых районов хромосом человека. Хромосомы человека в норме и патологии. М. МОИП, Наука 1989; 63-73.

12. Yurov Y.B., Soloviev I.V., Yorsanova S.G., Alexandrov I.A., Sharonin V.O., Monachov V. DNA probes for pre- and postnatal diagnosis of cromosomal anomalies: a collection for FISH analysis. Cesko-slovenska pediatrie 1997; 52: 7: 550-554.

13. Vorsanova S.G., Yurov Y.B., Soloviev I.V., Demidova I.A., Malet P. Rapid identification of marker chromosomes by in situ hybridization under different stringency conditions. An Gell Patol 1994; 7: 251-258.

14. ISCN (An International System for Human Cytogenetic Nomenclature. Cytogenetics and Cell Genetics 1995; 114.

15. Banerjee P., Talukder G., Sharma A. Chromosomal alterations in recurrent abortions. Bionature 1988; 8: 1: 19-24.

16. Brecevic L. Anomalije kromosoma u parova s ponawljanim repraductivnim gubicima. Arh majke i diet 1987; 31: 1: 39-40.

17. Ворсанова С.Г., Казанцева Л.З., Демидова И.А., Дерягин Г.В. Цитогенетическая диагностика у супружеских пар с отягощенным акушерским анамнезом. Вопросы охраны материнства и детства 1989; 6: 52-56.

18. Martens P., Welroy S., Tharapel A., Summitt R. Cytogenetic findings in 255 couples referred, for multiple fetal loss. Amer J Hum Genet 1984; 36: 4: 103.

19. Bourronillon C., Golombies P., Dastugue N. Chromosome studies in 136 couples with spontaneous abortions. Hum Genet 1986; 74: 4: 399-401.

20. Deininger Р.L., Jollu D.J., Rubin C., Freidmann Т., Schmidt C.W. Base sequence studies of 300 nucleotide renaturated repeated human DNA clones. J Mol Biol 1981; 151: 17-33.

21. Hsu L.Y., Benn P.A., Tannenbaum H.L., Perlis Т.Е., Carison A.D. Chromosomal polimorphisms of 1, 9, 16 and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study. Amer J of Medical Genet 1987; 26: 95-101.


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования