Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   BOAI: наука должна быть открытой Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина >> Лабораторная и функциональная диагностика | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение
 См. также

Научные статьиАномалии половых хромосом при нарушении репродуктивной функции у мужчин: Литература

Научные статьиАномалии половых хромосом при нарушении репродуктивной функции у мужчин: (1)

Научные статьиНеобычное проявление синдрома Клайнфелтера у мальчика 1,5 лет: молекулярно-цитогенетическая диагностика мозаичной формы полисомии хромосомы Х: Литература

Научные статьиДисомия хромосом в половых клетках мужчин при нарушении сперматогенеза: Литература

Научные статьиУровень нерасхождения хромосом на разных стадиях развития мужских половых клеток человека: Литература

Молекулярно-цитогенетическая диагностика хромосомных аномалий у супружеских пар с нарушением репродуктивной функции

С.Г. Ворсанова, А.К. Берешева, Л.З. Казанцева, И.А. Демидова, В.О. Шаронин, И.В. Соловьев, Ю.Б. Юров

Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ, Научный центр психического здоровья РАМН, Москва.

В начало...


Представлены результаты цитогенетического и молекулярно-цитогенетического обследования 290 (580 индивидуумов) супружеских пар с нарушением репродуктивной функции (НРФ). Проведен сравнительный анализ частоты различных цитогенетических находок в зависимости от конкретного повода обращения. Особое внимание уделено необходимости применения молекулярно-цитогенетического метода для изучения и идентифицирования хромосомных аномалий, встречаемых у супружеских пар с НРФ. Выявлено, что более 40% индивидуумов из супружеских пар с НРФ и хромосомными аномалиями нуждаются в молекулярно-цитогенетической диагностике.

Ключевые слова:

нарушение репродуктивной функции, кариотип, хромосомные аномалии, молекулярно-цитогенетическая диагностика.

В процессе генетического консультирования супружеских пар с нарушением репродуктивной функции (НРФ) при выяснении причин возникновения бесплодия, спонтанных абортов, рождения ребенка с множественными врожденными пороками развития (МВПР) и/или микроаномалиями развития (МАР), а также при определении повторного риска данных негативных событий в семье и тактики проведения пренатальной диагностики ведущая роль принадлежит цитогенетическим исследованиям.

Опыт генетического консультирования [1, 2] свидетельствует о том, что примерно каждая 8-я супружеская пара с НРФ нуждается в цитогенетической диагностике. Определение носителей той или иной хромосомной патологии у супругов с НРФ невозможно без цитогенетического анализа, так как хромосомные нарушения у фенотипически здоровых индивидуумов встречаются, как правило, либо в сбалансированном состоянии (транслокации, инверсии), либо в виде "скрытого" минимального мозаицизма, либо при дополнительной маркерной хромосоме. Методы традиционной цитогенетики не могут полностью обеспечить эффективность выявления и анализа подобной патологии. В данной ситуации применяется молекулярно-цитогенетическая диагностика. В последнее время используя молекулярно-цитогенетические методы и хромосомоспецифичные ДНК-пробы на все хромосомы и их участки появилась возможность диагностики всех ранее недифференцированных хромосомных аномалий у супружеских пар с НРФ [2, 3].

В настоящей работе представлен анализ результатов комплексного цитогенетического и молекулярно-цитогенетического обследования 290 супружеских пар с НРФ, обратившихся за генетической консультацией в течение 10 лет.

Материалы и методы

Традиционное цитогенетическое исследование каждой супружеской паре проводилось по показаниям, принятым в клинической генетике: наличие в анамнезе ребенка c хромосомными аномалиями, МВПР и/или MAP, спонтанных абортов на различных сроках беременности, мертворождений и бесплодия [4]. Средний возраст супружеских пар с НРФ для женщин составил 28,9 года, а для мужчин 30,6 года. Цитогенетическая и молекулярно-цитогенетическая диагностика у супружеских пар с НРФ проводилась на препаратах метафазных и интерфазных хромосом, которые готовили по общепринятому методу [5]. Хромосомы идентифицировали после дифференциального окрашивания (С-метод, G-метод) при увеличении 1125. При метафазном анализе учитывали не менее 11 метафаз, при интерфазном - не менее 100 клеток. В случае обнаружения хромосомной нестабильности (дицентрики, кольца, парные фрагменты, хромосомные и хроматидные разрывы, пробелы) анализировали также по 100 метафазных пластинок. Молекулярно-цитогенетическая диагностика при помощи гибридизации клонированных последовательностей ДНК с метафазными и интерфазными хромосомами в условиях in situ проводилась по ранее описанным методам [6, 7] с последующими модификациями [8]. Результаты молекулярной гибридизации оценивали с помощью анализа интерфазных и метафазных клеток [9, 10]. В случае мозаицизма идентифицировали не менее 100 клеток. При этом применяли оригинальную коллекцию альфоидных, "классических" сателлитных и сайтспецифичных ДНК-проб, полученных в лаборатории цитогенетики научного центра психического здоровья РАМН [11, 12]. Для определения происхождения маркерных хромосом применялась оригинальная тактика диагностики [13]. Запись цитогенетического и молекулярно-цитогенетического диагноза производилась по международной номенклатуре стандартизации цитогенетических исследований [14].

Результаты и обсуждение

Анализ причин обращения супружеских пар с НРФ показал, что наиболее часто встречались семьи, имеющие ребенка с МВПР и/или MAP - 210 (73%), реже со спонтанными абортами - 53 (18%), с сочетанными нарушениями - 23 (8%) и с бесплодием - 4 (1%) (рис. 1).

Рис. 1. Структура обращений в генетическую консультацию 290 супружеских пар (580 индивидуумов) с НРФ.

В результате анализа кариотипа супружеских пар с НРФ у 35 (6%) из 580 пациентов были выявлены хромосомные аномалии. У 127 (22%) индивидуумов были обнаружены хромосомные варианты, у 17 (3%) - хромосомная нестабильность, а у 401 (69%) индивидуума каких-либо кариологических особенностей не наблюдалось, т.е. кариотип был нормальным (рис. 2).

Рис. 2. Удельный вес хромосомных особенностей у супружеских пар с НРФ.

Результаты сравнительного анализа частоты различных цитогенетических особенностей в зависимости от конкретного повода обращения свидетельствуют о том, что в группе супружеских пар со спонтанными абортами повышена частота нестабильности хромосом (9 из 17 случаев). Подобные данные получены и другими исследователями [15]. У 210 (73%) пар, у которых отмечено рождение ребенка с МВПР и/или MAP, хромосомные аномалии и хромосомные варианты выявлялись чаще, чем в остальных группах: 23 случая из 35 обнаруженных хромосомных аномалий и 89 случаев из 127 хромосомных вариантов. На основании наших и ранее полученных результатов [16,17] можно заключить, что основная (или одна из основных) причина обращения супругов в генетическую консультацию несомненно связана с теми или иными хромосомными нарушениями.

Результаты наших исследований показывают, что частота хромосомных аномалий у супружеских пар с НРФ составляет 6%. Подобные работы, проведенные ранее другими исследователями, свидетельствуют также о высоком удельном весе (от 4,3 до 9,6%) хромосомной патологии у пациентов, обратившихся в генетическую консультацию по аналогичным причинам [2, 18, 19]. Из обнаруженных 35 случаев носителей хромосомных аномалий (рис. 3) большинство составили сбалансированные аутосомные транслокации, которые выявили у 15 пациентов, и мозаицизм аномалий гоносом - у 14 индивидуумов. Маркерные хромосомы наблюдали у 5 пациентов, а у 1 - дупликацию (дополнительный хромосомный материал) короткого плеча хромосомы 22.

Рис. 3. Структура хромосомных аномалий, обнаруженных у 290 супружеских пар с нарушением репродуктивной функции (35 случаев).

В процессе исследования были установлены семейные случаи хромосомных аномалий, среди которых 7 случаев структурных сбалансированных транслокаций, 3 - гоносомных синдрома (синдром Шерешевского-Тернера, включая изохромосому X), 1 - частичной дупликации, а также 3 - различных маркерных хромосом у родителей. Их дети имели хромосомную аномалию с различными врожденными пороками развития (ВПР) и/или MAP, а также задержку психомоторного развития (ЗПМР). Во всех случаях родители оставались фенотипически здоровыми.

Из 35 случаев хромосомных аномалий в 15 вставал вопрос о проведении молекулярно-цитогенетической диагностики. Особый интерес представляли случаи, в которых обнаруженные хромосомные аномалии после проведения цитогенетического исследования у родителей и детей определялись как идентичные. В ситуациях, когда речь шла о транслокациях, перед нами встал вопрос о "сбалансированности" подобных перестроек у детей или, другими словами, о возможной потере хромосомного материала, неидентифицированного на цитогенетическом уровне. Для решения этого вопроса возникала необходимость уточнения точек разрыва на транслоцированных хромосомах. Примеры подобных случаев представлены в табл. 1 (случаи N 6 и 7). Так, у матери при цитогенетическом анализе была обнаружена дицентрическая транслокация (15; 18), подобная транслокация у ребенка. При этом мать - фенотипически здорова, а у ребенка отмечалась олигофрения и множество микроаномалий развития. Традиционные цитогенетические методы с применением дифференциального окрашивания хромосом оказались малоэффективны. Для уточнения точек разрыва в транслоцированных хромосомах использовали альфоидные ДНК-пробы pPD18 (хромосома 15) [20] и pYAМ3-86, PAC36.15.G (хромосома 18) [12]. После проведения молекулярно-цитогенетической диагностики у пробанда обнаружена делеция короткого плеча хромосомы 18, т.е. 18р-синдром. У матери подтвердилось наличие сбалансированной транслокации с кариотипом: 45,XX,diсt (15;18) (p11;p11). isht(15;18)(p11;p11)(pPD18х2,pYAM3-86х2,PAС36.15.Gх2). Кариотип ребенка имел следующую форму записи: 45,XY,dict (15;18)(р11;р11). isht(15;18)(p11;p11.31)(pPd18х2,pYА3-86х2,PAC36.15. Gх1). Аналогичные результаты былиполучены при диагностике транслокации (4;7) у матери и ребенка (см. табл. 1, случай 7). В результате молекулярно-цитогенетического исследования обнаружена сбалансированная транслокация у матери и несбалансированная транслокация у ребенка, определяющая множественные MAP и умственную отсталость.

Молекулярно-цитогенетическую диагностику применяли и для выяснения добавочного хромосомного материала неизвестного происхождения (addition - add) на коротком плече хромосомы 22 у матери и ребенка (см. табл. 1, N 8) в случаях, когда мать фенотипически здорова, а у ребенка наблюдались ЗПМР и MAP. Для этого были использованы следующие ДНК-пробы: 1) альфа-сателлитная (MСG14-22, cosВ103), 2) "классическая" сателлитная (рРD 9), 3) рибосомальная (cos13-36), 4) теломерная (РАС 90.14.В). После оценки результатов молекулярно-цитогенетического исследования показано, что увеличение короткого плеча хромосомы 22 в обоих случаях происходит за счет рибосомальной ДНК. Это позволяет предположить, что данный дополнительный хромосомный материал не является причиной ЗПМР и MAP у ребенка.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования