Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Зарегистрируйтесь на нашем сервере и Вы сможете писать комментарии к сообщениям Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение

Особенности морфофункциональных характеристик половых клеток у больных варикоцеле

С.Б. Артифексов, А.А. Одинцов, А.А. Артифексова

Государственная медицинская академия, Областной медицинский центр планирования семьи и репродукции, Москва

В начало...


Изучались морфофункциональные характеристики сперматозоидов 719 самцов белых крыс и 366 мужчин с варикоцеле. Оценивалась оплодотворяющая способность половых клеток, а также их подвижность и структура. Показано, что использование стандартных методов оценки качества половых клеток не приносит успеха в определении их фертильности. Этого позволяет достичь лишь детальный анализ двигательной активности гамет. Для варикоцеле характерно наличие избытка гиперактивированных сперматозоидов в эякуляте, что является результатом "преждевременной" капацитации вследствие дисфункции придатка яичка.

Ключевые слова:

варикоцеле, сперматозоиды.

Впервые связь варикоцеле с бесплодием была показана Тulloch в 1952 г., и с тех пор это мнение поддерживается большинством исследователей [5, 12, 14]. Данные последних лет, полученные при исследовании искусственного осеменения и теста пенетрации спермы - одного из наиболее объективных критериев фертильности гамет, также свидетельствуют, что фертильность при варикоцеле достоверно ниже [15]. Однако если определенную связь между варикоцеле и мужским бесплодием трудно отрицать, то морфофункциональный субстрат последнего еще не выявлен. Это и определило цели и задачи исследования: клинико-экспериментальное изучение сдвигов морфофункциональных характеристик гамет эякулята при варикозном изменении вен мошонки и выяснение некоторых патогенетических аспектов их формирования.

Материалы и методы

Опыты были поставлены на 719 белых беспородных половозрелых крысах-самцах массой 270-350 г и 60 самках массой 230-290 г возрастом от 4 мес до 1 года. Выбор белых крыс в качестве модели для изучения мужской половой системы объясняется тем, что этот вид животных обладает высокой плодовитостью и круглогодично размножается в условиях вивария [3, 6, 7, 10].

Нарушение венозного оттока от половых желез моделировалось посредством перевязки семенниковых вен у места их впадения в нижнюю полую вену или в общие подвздошные вены, где это можно сделать, не затрагивая артериальные сосуды [2]. Для моделирования одностороннего нарушения венозного оттока от семенников было использовано 575 животных (1-я группа); 85 животным была проведена ложная операция, заключавшаяся в тех же манипуляциях без наложения лигатуры (2-я группа).

Для опытной и контрольной групп отбирались самцы крыс с однородными показателями морфофункционального состояния сперматозоидов, соответствующими норме. С этой целью трехкратно получали эякулят (ежедневно в течение 3 дней) разработанным нами методом стимуляции семяизвержения 2% раствором окситоцина. Кроме того, использовался оригинальный способ электростимуляции семенного бугорка [1]. Операции выполнялись на следующий день после получения третьего эякулята у интактных крыс.

Самцы опытной (1-й) и контрольной (2-й) групп подвергались стимуляции окситоцином или электростимуляции для получения эякулята на 7, 14, 21, 30, 45, 60, 75, 90 и 120-е сутки после операции. Сперматозоиды исследовались по описанным ниже методикам.

С целью изучения оплодотворяющей способности половых клеток после одностороннего нарушения венозного оттока от семенников по 10 самцов 1-й группы подвергались спариванию с интактными самками в период с 30-х по 70-е сутки после наложения лигатуры. В каждый из исследуемых сроков использовалось 20 самок.

Также было обследовано 366 мужчин с варикоцеле в возрасте от 21 до 41 года, обратившихся по поводу бесплодия. Продолжительность заболевания составляла от 6 мес до 15 лет. У 340 (92,5%) мужчин варикозное расширение вен выявлено с левой стороны, у 16 (4%) - с обеих сторон и лишь у 10 (3%) - справа. Первая степень заболевания (по классификации Нечипоренко, 1964) диагностирована у 63 (17%) больных, вторая - у 219 (60%), третья - у 84 (23%). Исследование эякулята, полученного путем мастурбации после 3-4 дней полового воздержания, проводилось у больных варикоцеле и в контрольной группе (92 мужчины, имеющие беременных жен). Сперматозоиды животных и человека исследовали по стандартной схеме (ВОЗ, 1986): а) определение количества сперматозоидов. С этой целью 0,1 мл разведенного эякулята животных переносили в пробирку, содержащую 0,9 мл среды 199, и тщательно перемешивали. Разведение эякулята мужчин в 20 раз производили в лейкоцитарном меланжере. Подсчет проводили в камере Горяева; б) оценка подвижности сперматозоидов. Исследовали подвижность сперматозоидов в капле нативного эякулята на стекле. Общее количество анализируемых при этом клеток в каждой пробе равнялось 100. Раздельно учитывались сперматозоиды, совершающие активные поступательные (нормокинезис), колебательные без продвижения вперед (гипокинезис) движения, а также неподвижные сперматозоиды (акинезис). Результаты выражали в процентах. У части больных варикоцеле (43) и всех самцов крыс определяли скорость и траекторию движения половых клеток в эякуляте с помощью устройства на базе телевизионного микроскопа и компьютера. С этой целью каплю эякулята, накрытую покровным стеклом, помещали под объектив телемикроскопа и производили съемку инвертированного изображения с экрана монитора на пленку с выдержками от 1 до 6 с. При этом на фотопленке фиксировались треки движения половых клеток, по которым рассчитывалась линейная скорость движения сперматозоидов (в мкм/с) и оценивалась траектория их движения. Подсчет морфологических форм сперматозоидов животных проводился на мазках, окрашенных эозин-нигрозином, а сперматозоидов мужчин - на мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Для выяснения абсолютного количества клеток в половых железах самцов крыс сначала подсчитывали число сперматозоидов в гомогенате семенника на единицу массы органа. В гомогенаты также добавлялась среда 199, подсчет клеток проводился по методике, аналогичной таковой при подсчете клеток в эякуляте. Зная абсолютное количество сперматозоидов в единице массы органа (расчет велся на 1 мг) и долю (процент) содержания их в яичке по данным цитометрии на мазках из ткани тестикул, вычислялось абсолютное их количество в мужской половой железе на единицу массы. Количество половых клеток оценивалось (раздельно) в головке и хвосте придатка яичка. Кроме того, гаметы из яичка и его придатка исследовались по той же схеме, что и клетки эякулята.

Статистическая обработка материала проводилась с применением критерия Стьюдента и непараметрического критерия Т.

Результаты и обсуждение

Исследования эякулятов мужчин с варикоцеле, состоящих в бесплодных браках, жены которых были признаны при гинекологическом обследовании практически здоровыми, показали, что в этой группе речь чаще (в 66% случаев) шла лишь о достоверном снижении описанных выше показателей спермограмм в сравнении с контрольной группой, но не в сравнении с предложенной ВОЗ (1987) нижней границей показателей, характеризующих фертильную сперму. В наших исследованиях ниже этого уровня показатели спермограмм отмечались лишь у 31% больных варикоцеле, состоящих в бесплодных браках. Аналогичные результаты, полученные другими исследователями, часто трактуются ими как доказательство отсутствия связи между варикоцеле и бесплодием [11]. Однако, на наш взгляд, они являются лишь отражением относительной диагностической ценности самих рутинных методик оценки качества спермы.

Сказанное нельзя целиком отнести лишь на счет недостаточной подготовленности персонала лабораторий, поскольку, например, при определении подвижности гамет возникают и объективные сложности, обусловленные, в частности, функциональными особенностями зрительного анализатора, ставящего число перемещающихся объектов в поле зрения в прямую зависимость от их общего числа (Шмидт и соавт.,1985). Использование в этих условиях фототелевизионного устройства позволило показать, что нарушение двигательной активности гамет при бесплодии, ассоциированном с варикоцеле, значительно глубже и наблюдается у 91% обследуемых, средняя скорость прямолинейного движения гамет у которых снижалась до 15,9 0,7 мкм/с (р<0,05). Характер движения гамет был также существенно изменен. Количество клеток с криволинейным характером движения было увеличено до 67,2 4,1% от всех поступательно перемещающихся клеток. Таким образом, для эякулятов больных варикоцеле, несмотря на отсутствие грубых нарушений показателей спермограмм и их гетерогенность, характерен ряд изменений, доминирующее положение среди которых занимало нарушение характера их двигательной активности, проявляющееся уменьшением числа прямолинейно перемещающихся клеток, скорости их движения, а также увеличением в популяции количества криволинейно и беспорядочно и очень быстро перемещающихся сперматозоидов и числа гамет с активными латеральными смещениями головки. Справедливость такого вывода была проверена экспериментально. Для половых клеток интактных самцов белых крыс были характерны высокая подвижность и жизнеспособность при высокой концентрации в ограниченном объеме эякулята. Так, общее количество сперматозоидов в эякуляте равнялось 11,6 1 млн. Подвижных гамет в эякулятах было 10 1 млн. (85 2%), причем поступательно перемещающихся было 65 3,5%. При исследовании на светооптическом уровне структуры половых клеток было выявлено, что 95 1% их имеют морфологически нормальное строение головки, тела и хвоста. Через 2 нед после перевязки левой внутренней семенниковой вены количество сперматозоидов достоверно уменьшалось до 8,4 0,6 млн., при этом процент живых клеток снизился до 71,9 2, а количество подвижных клеток в эякуляте - до 5,6 0,4 млн. (66,7 2,9%). Количество прямолинейно перемещающихся клеток на 14-е сутки опыта составляло 24,1 2,3%. На 30-е сутки эксперимента продолжалось ухудшение показателей спермограмм животных. Так, количество сперматозоидов через месяц после перевязки составило 3,6 0,4 млн., из них 1,6 0,3 млн. сперматозоидов в эякуляте обладали подвижностью (43,9 7,1%), тогда как поступательно перемещающихся было только 16,7 2,6% клеток. В последующие сроки эксперимента показатели спермограммы оставались на этом минимальном уровне вплоть до окончания эксперимента на 120-е сутки после операции.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования