Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   BOAI: наука должна быть открытой Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина >> Лабораторная и функциональная диагностика | Обзорные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение

Использование сперматид в процедуре ЭКО/ИКСИ

П.А. Гоголевский

Московский центр по лечению бесплодия ЭКО

В начало...


Представлены данные литературы, касающиеся использования незрелых мужских гамет для оплодотворения ооцитов с помощью интрацитоплазматической инъекции. Обсуждаются проблемы, связанные с применением сперматид, и эффективность их использования в программе ЭКО/ИКСИ.

Ключевые слова:

ЭКО, ИКСИ, cперматиды.

Словарь

ИКСИ (ICSI) - интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида.

Сингамия - объединение гаплоидных наборов хромосом женского и мужского пронуклеусов оплодотворенной яйцеклетки.

Синдром только клеток Сертоли - форма дизгенеза семенников, характеризующаяся бесплодием в результате недоразвития сперматогенного эпителия половых желез.

Синдром Клайнфельтера - обусловлен трисомией по половым хромосомам - XXY. Проявляется в нарушениях сперматогенеза, в недоразвитии вторичных половых признаков и т.д.

Синдром Кальмана - ольфактогенитальный синдром, характеризующийся врожденным отсутствием обоняния и задержкой полового развития вследствие поражения обонятельного нерва и комплекса эндокринных расстройств; локус KAL расположен на участке p22.32 X-хромосомы.

Спермиогенез - заключительный этап сперматогенеза, в процессе которого происходит формирование сперматозоидов из сперматид.

Осцилин (SCF) - растворимый цитозольный фактор (33кД) локализующийся в экваториальном сегменте головки сперматозоида. Инициирует активацию ооцита посредством запуска осциляции ионов Са2+.

Гистоны - белки содержащиеся в ядрах клеток в виде комплекса с ДНК, выполняют важную функцию в ее упаковке, формируют нуклеосомы - основные структурные субъединицы хроматина.

Протамины - низкомолекулярные основные ядерные белки, содержащиеся в сперматозоидах и участвующие в конденсации ДНК сперматозоидах.

ЭКО - экстракарпоральное оплодотворение.

Введение

Метод интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов (ИКСИ) является мощным орудием для лечения бесплодия, обусловленного тяжелыми формами олигоастенотератозооспермии и отсутствием оплодотворения in vitro неясного генеза [25,40,41]. Данный метод также с успехом применяется для достижения оплодотворения и беременности с использованием эпидидимальных и тестикулярных сперматозоидов, полученных у мужчин, страдающих обструктивной формой азооспермии и даже при необструктивных формах азооспермии, обусловленной дефектным сперматогенезом [20, 37,10,29]. Однако, у некоторых мужчин невозможно получить даже единичные сперматозоиды из-за серьезного нарушения сперматогенеза и блока их созревания на стадиях сперматид. Так, например, при синдроме только клеток Сертоли, блоке созревания, евнухоидизме, атрофии канальцев при крипторхизме, синдроме Клайнфельтера и др. шансы обнаружить сперматозоиды в биоптате яичка невелики. Однако теперь и у таких пациентов появилась надежда стать генетическими отцами благодаря интрацитоплазматической инъекции сперматид.

В настоящем обзоре приводятся результаты экспериментальных исследований и клинического применения сперматид на разных стадиях дифференцировки (ранних - круглых и поздних - удлиняющихся и удлиненных сперматид) при лечении мужского бесплодия в программе ЭКО.

В экспериментах на хомяках и мышах было показано, что круглые сперматиды или изолированные ядра круглых сперматид способны участвовать в сингамии после их введения в зрелые ооциты путем инъекции или электрослияния [22,23]. Потомство было получено после слияния мышиных ооцитов со сперматидами [24]. Успешное оплодотворение было достигнуто после интрацитоплазматической инъекции изолированных ядер круглых сперматид у кроликов [32] и у мышей [15]. Таким образом, первоначальные исследования на животных продемонстрировали возможность достижения оплодотворения и рождения нормального плодовитого потомства после инъекции сперматид в ооциты.

Впервые об успешном оплодотворении ооцитов человека после инъекции сперматид, находящихся на поздних стадиях развития, было сообщено Vanderzwalmen [39]. Tesarik с соавт. [35] сообщил о первых двух детях, рожденных после переноса эмбрионов, полученных с помощью ИКСИ с использованием сперматид. Совсем недавно появилось несколько сообщений о наступлении беременности и рождении нормальных детей при использовании круглых и удлиненных сперматид, выделенных из эякулята или яичек [34,35,3,5]. Однако до настоящего времени имеется лишь ограниченное число оригинальных опубликованных работ, посвященных наступлению беременности и рождению детей после использования сперматид [3 - 5,35,12,13,6,19].

Antinori с соавт. [3] выполнили TESE у 36 мужчин, страдающих необструктивной формой азооспермии. Круглые сперматиды (КС) были инъецированы в 135 зрелых ооцитов, полученных от 19 пациентов; удлиненные сперматиды (УС) инъецированы в 123 ооцита в 17 циклах. Процент оплодотворения и частоты дробления составили для КС 55,5% и 74,6%, для УС - 57,7% и 77,4%, соответственно. Было получено 5 беременностей (2 в группе КС - 10,5% и 3 в группе УС - 17,6%). Кариотипирование плодов не выявило каких-либо генетических аномалий.

В работе Fishel S. с соавт. [12] сравнивали частоту оплодотворения после инъекции сперматид, полученных из эякулята и биоптата яичка. Всего было инъецировано 207 зрелых ооцитов, из них 64 КС, 92 УС и 51 сперматозоидами. Частота оплодотворения составила 30%, 24% и 67% соответственно. Наблюдалось значительное увеличение частоты оплодотворения (р<0,001) при использовании сперматозоидов по сравнению со сперматидами. Частота оплодотворения практически не различалась при использовании круглых или удлиненных сперматид, хотя при инъекции КС и УС, полученных из эякулята, частота оплодотворения составила 33% и 18%, тогда как при использовании тестикулярных сперматид данные показатели составили 22% и 38% соответственно. У трех пациентов на ооцитах-сибсах сравнили эффективность ИКСИ сперматидами, полученными из эякулята со сперматозоидами, извлеченными из семявыносящих канальцев. Общая частота оплодотворения после инъекции сперматид была значительно ниже 26,3%, чем после ИКСИ тестикулярными сперматозоидами (66,7%). Не было выявлено значительного различия в частоте оплодотворения при использовании сперматид из эякулята или тестикулов.

Влияние криоконсервации на целостность и оплодотворяющие способности КС были изучены у двух пациентов, страдающих азооспермией, обусловленной блоком созревания сперматогенеза [3]. После проведения биопсии яичка были обнаружены только КС, которые и использовались для инъекции и криоконсервации. Из-за отсутствия имплантации в первых попытках у обеих пациенток во втором цикле проводили ИКСИ замороженными-оттаянными сперматидами. После оттаивания более 70% сперматид были пригодны для инъекции. Из 15 инъецированных ооцитов 7 показали нормальное оплодотворение и 6 нормальное дробление. После ПЭ у одной пациентки наступила беременность. В следующей работе этих авторов [4] было инъецировано замороженными-оттаянными сперматидами 48 ооцитов, полученных от 7 пациенток. 26 (54%) ооцитов нормально оплодотворилось и 19 (73%) зигот подробилось. Получено две беременности после 6 ПЭ. Хромосомный анализ, выполненный на 16 неделе беременности, выявил нормальный кариотип всех плодов. Представленные данные говорят о том, что замороженные-оттаянные круглые сперматиды сохраняют свою оплодотворяющую способность и могут быть использованы в последующих циклах для проведения ИКСИ.

Antinori S. с соавт. [4,5] провели рандомизированное исследование, в котором сравнили оплодотворение, дальнейшее развитие эмбрионов и наступление беременности после инъекции круглых и удлиненных сперматид. Всего 211 зрелых ооцитов, полученных в 29 циклах, были инъецированы круглыми сперматидами ( группа А) и 229 ооцитов в 39 циклах инъецированы удлиненными сперматидами (группа В). Частота оплодотворения, дробления и наступления беременности в группе А составила 55,4%, 69,5% и 13,7%, а в группе В - 69%, 75,3% и 20,5% соответственно. Эти данные говорят, что оплодотворяющий потенциал УС значительно выше КС.

Chen S.U. с соавт. [9] провели инъекцию сперматид в 13 ооцитов, полученных от одной пациентки. Четыре ооцита нормально оплодотворились и по одному ооциту имели 3 и 1 пронуклеусы. На 2 день был выполнен ПЭ. Беременность не наступила.

Schoysman R. с соавт. [28] сообщили о результатах инъекции круглых и поздних сперматид. В первой группе мужчин с предварительной положительной тестикулярной биопсией (обнаружены сперматозоиды) было проведено 2 попытки с помощью инъекции поздними сперматидами (ПС) и 10 с КС. В другой группе из 5 пациентов (блок созревания, очень высокий уровень ФСГ) с предварительной негативной биопсией небольшое количество КС было обнаружено только в 3 случаях. Процент оплодотворения в 1 группе составил 100% (4/4) после инъекции ПС. После инъекции КС он достиг 26% (10/32) без искусственной активации и 33% (4/12) и 64% (7/11) после обработки ооцитов манитолом и кальцием ионофором соответственно. В группе с предварительной негативной биопсией процент оплодотворения составил только 14%. Из 28 зигот 25 нормально подробилось. После выполнения ПЭ было получено две беременности (одна после инъекции ПС и одна после КС).

В работе Vanderzwalmen P. с соавт. [38] зрелые, удлиненные, удлиняющиеся и круглые сперматиды были использованы для инъекции соответственно в 3, 2, 3 и 32 попытках). С помощью КС было инъецировано в общей сложности 260 ооцитов и 36 ооцитов инъецировано сперматидами других стадий. Частота оплодотворения после инъекции КС зависела от процента сперматозоидов, обнаруженных во время предварительной диагностической биопсии яичка. Пациенты с позитивными результатами предварительной биопсии имели значительно выше процент оплодотворения (33%) по сравнению с пациентами, у которых полностью отсутствовали сперматозоиды (11% р<0,05). Инкубация ооцитов в среде, содержащей кальций ионофор, после инъекции КС позитивно влияло на оплодотворение (36% против 16 % в контроле). 90% из всех нормально оплодотворившихся ооцитов подробились и процент эмбрионов класса А и В зависел от стадии зрелости сперматид ( 12% для КС и 30% для остальных стадий). Наступило пять беременностей после 39 ПЭ. Частота имплантации составила 5,5%, что значительно ниже таковой в обычной программе ИКСИ/ТЕSЕ с использованием тестикулярных сперматозоидов (10,5%).

В случаях абсолютной азооспермии, подтвержденной несколькими повторными исследованиями центрифугированного эякулята, возможен незначительный локальный сперматогенез в яичках. И даже когда тестикулярная диагностическая биопсия выявляет полное отсутствие сперматогенеза, существует вероятность, что в некоторых участках могут продуцироваться единичные сперматозоиды или их предшественники. Так у 14 мужчин, страдающих секреторной формой азооспермии, обусловленной блоком созревания или синдромом только клеток Сертоли, у которых в предварительных диагностических биопсиях не было выявлено сперматогенеза, была проведена попытка извлечения спермы с помощью TESA [30]. В 13 из 14 случаев были извлечены сперматозоиды и/или зрелые сперматиды в количестве, достаточном для проведения ИКСИ.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования