Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина >> Лабораторная и функциональная диагностика | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение

Определение противомозговых антител в крови больных с опухолями головного мозга методом гидрозольной иммуноагглютинации

Ю.В. Кислицын, А.Г. Мещандин

Кафедра неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики, кафедра химии Кировского государственного медицинского института

В начало...


Принято считать, что высокие титры противомозговых антител (ПМА) в сыворотке крови можно рассматривать как критерий активности аутоиммунного процесса против мозговой ткани [1-8].

С учетом диагностической и клинической ценности определения ПМА в сыворотке крови неврологических и нейрохирургических больных становится важным вопрос о способе их выявления. Наиболее распространенным методом определения ПМА остается реакция пассивной гемагглютинации, основанная на сорбировании мозгового антигена на эритроцитах барана с последующим взаимодействием их с ПМА сыворотки крови больного. Несомненным достоинством этого метода является его относительная простота и надежность. Тем не менее нельзя не отметить и ряд его недостатков - возможность реагирования ПМА не с антигенами мозга, а с эритроцитами, многоэтапность приготовления реактивов и их нестойкость, необходимость большого объема сыворотки крови. Иммунодиагностические методы, обладающие высокой разрешающей способностью (иммунофлюоресценция, иммуноферментный и радиоиммунологический анализ), требуют специальных оборудования и набора реактивов, что исключает возможность их широкого применения вне крупных лечебных учреждений.

Поиск простого и одновременно надежного скринингового метода диагностики ПМА является актуальной задачей. Одним из них может стать способ диагностики ПМА сыворотки крови с использованием гидрозольного препарата на основе оксида трехвалентного железа, на поверхности которого сорбируется антиген мозговой ткани, приготовленный методом водно-солевой экстракции. Подобный антигенный носитель биологически инертен, прост в приготовлении и сохраняет свои качества в течение 4 мес после сорбирования мозгового антигена. Кроме того, основанный на использовании гидрозольной иммуноагглютинации (ГИА) метод предусматривает взятие небольшого (не более 0,1 мл) объема исследуемой жидкости, что делает его доступным в амбулаторной диагностике, а также при обследовании детей и тяжелобольных (например, с кахексией).

Постановка реакции включает следующие этапы. В лунках планшета со скошенным дном готовят разведения сыворотки крови больных в титре от 1:2 до 1:128. Затем в каждое разведение добавляют 40 мкл гидрозольного препарата оксида железа с сорбированным мозговым антигеном. После инкубации в термостате при 37њС в течение 20 мин проводят визуальную оценку или микроскопию осадка. Положительной реакцией считается наличие агглютинации в разведении 1:8 и выше.

Возможности метода ГИА были испытаны при определении ПМА в сыворотке крови 56 больных с опухолями головного мозга (менингиомами и невриномами слухового нерва) до и после операции. Контрольную группу составили пациенты с остеохондрозом поясничного отдела позвоночника, не имевшие в анамнезе черепно-мозговых травм, нарушений церебрального кровообращения и нейроинфекций.

Исследование проводили при поступлении больных, а также на 3-5, 8-10 и 15-18-е сутки после операции. Процент положительных реакций ГИА в каждой группе больных сопоставляли с результатами исследования уровня ПМА у тех же пациентов, полученными в ходе иммуноферментного анализа (ИФА) при сорбировании на твердой фазе водно-солевого экстракта мозговой ткани (концентрация белка 5 мкг/мл). Исследование проводили при разведении сыворотки крови 1:200. В качестве иммуноферментного конъюгата использовали набор антител против IgG человека, меченных пероксидазой (тест-система <ЭКОлаб-ВИЧ-1, 2>). Реакцию оценивали на ридере "Organon Teknika Reader 530" (Финляндия) при 492 нм. По результатам ИФА в контрольной группе была определена условная <норма реакции> (уровень ПМА в диапазоне M s). В группах пациентов с опухолями головного мозга был вычислен процент больных, у которых уровень ПМА превышал условную <норму реакции>.

При исследовании содержания ПМА сыворотки крови у больных менингиомами до операции было выявлено, что положительная реакция, полученная в ходе как ИФА, так и ГИА, выявлялась примерно в половине наблюдений (65,8 и 44,7% соответственно), показатели у больных с невриномами слухового нерва были ниже (11,1 и 22,2%). После удаления опухоли на 8-10-е сутки в обеих группах имело место нарастание уровня ПМА: 84,4 и 79,5% при менингиомах, 100,0 и 92,9% при невриномах по ИФА и ГИА соответственно. Максимальная выработка ПМА была отмечена на 15- 18-е сутки после удаления опухоли: при менингиомах до 80,0 и 86,7%, при невриномах до 100 и 100% по ИФА и ГИА соответственно.

Увеличение содержания ПМА в сыворотке крови в обеих группах в послеоперационном периоде является следствием повреждения гематоэнцефалического барьера в ходе хирургического вмешательства, что создает условия для индуцирования аутоиммунного процесса против вещества мозговой ткани. Однонаправленная динамика результатов исследования уровня ПМА в сыворотке крови больных менингиомами и невриномами, полученная в ходе высокочувствительного, но технологически сложного метода ИФА и более простого и дешевого ГИА, дает основание рассматривать последний как достаточно надежный способ определения ПМА в сыворотке крови. Учитывая описанные преимущества метода ГИА, можно рекомендовать его более широкое внедрение в диагностику различных заболеваний нервной системы.


Журнал неврологии и психиатрии N 5-2000, стр.58-59

Литература

1. Бадалян Л.О., Чехонин В.П., Бембеева Р.Ц. Журн неврол и психиатр 1997; 97: 1: 41-46.

2. Ганнушкина И.В., Жирнова И.Г., Игнатов В.Н. Клин мед 1972; 50: 9: 120-123.

3. Горбунов В.И., Лихтерман Л.Б., Ганнушкина И.В. Иммунопатология травматической болезни головного мозга. Ульяновск 1996.

4. Ермеков Ж.М. Вопр нейрохир 1997; 2: 23-25.

5. Мамытов М.М. Клиническое значение состояния иммунореактивности организма больных при хирургическом лечении опухолей головного мозга: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Киев 1986.

6. Фетисова И.Г. Клиническое значение изменения проницаемости гематоэнцефалического барьера при опухолях головного мозга и заболеваниях периферической нервной системы: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. М 1992.

7. Sahin U. et al. Proc Nat Acad Sci USA 1995; 92: 25: 11810-11813.

8. Wekerle H. et al. Pathophysiology of the blood-brain barrier. Amsterdam, New York, Oxford 1990; 439-445.


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования