Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Зарегистрируйтесь на нашем сервере и Вы сможете писать комментарии к сообщениям Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение

Чувствительность Escherichia coli О157:H7, возбудителя геморрагического колита, к антибактериальным препаратам

Светоч Э.А., Степаншин Ю.Г., Манзенюк И.Н., Степанов А.В., Храмов М.В., Рудницкий С.Ю., Борзенков В.Н., Ерусланов Б.В., Шобухова Т.С., Лобковский А.Г., Безобразова С.В., Попова Т.А.

ГНЦ прикладной микробиологии, Оболенск, ГИСК им. Л.А. Тарасевича, Москва, Тульский областной центр ГСЭН России

В начало...


Проведен сравнительный анализ антибиотикограмм энтерогеморрагических штаммов E.coli cерогруппы O157, выделенных на территории Российской Федерации и в Японии. Выявлены штаммы, обладающие множественной лекарственной устойчивостью. Исследованы основные биохимические свойства штаммов. Обнаружены существенные различия в спектрах чувствительности штаммов и их ферментативных свойствах.

Ключевые слова:

геморрагический колит, Escherichia coli O157:H7, антибиотикочувствительность.

Этиологическая роль E.coli O157:Н7 как возбудителя геморрагического колита (ГК) установлена недавно [1]. Тем не менее ГК, вызванный этим серотипом эшерихий, уже зарегистрирован в странах Южной и Северной Америки, Африки, Азии и Европы. Наибольшее количество спорадических случаев и групповых вспышек ГК отмечено в США, Англии и Канаде. В США, например, по расчетным данным Центра по контролю за инфекционными болезнями (CDC), количество больных ГК достигает 20000 в год, при этом около 250 случаев инфекции заканчивается летально [2]. В Великобритании в период 1993-1995 гг. зарегистрировано 18 вспышек ГК, заболеваемость ГК за это время возросла с 6 случаев на 100 тыс. населения до 411, а число смертельных исходов составило 2,5% [3]. Наиболее чувствительны к инфекции дети и пожилые люди. Именно у этих категорий больных заболевание нередко приобретает тяжелое течение, сопровождаясь гемолитико-уремическим синдромом (ГУС) и тромботической-тромбоцитопенической пурпурой (ТТП) [4].

В подавляющем большинстве случаев от больных ГК выделяют штаммы E.coli серотипа O157:Н7, продуцирующие шигаподобные цитотоксины (веротоксины) [5]. По данным большинства исследователей, основным резервуаром E.coli O157:Н7 является крупный рогатый скот, у которого инфекционный процесс может ограничиваться носительством. В силу этого обстоятельства инфицирование людей чаще всего происходит при употреблении в пищу недостаточно термически обработанных изделий из говядины (котлеты, сосиски, гамбургеры), а также коровьего молока, майонеза и других продуктов [6]. Тем не менее нельзя исключить возможность заражения человека E.coli O157:Н7 при употреблении продуктов из мяса других видов животных и птицы, поскольку, например, свиньи, овцы и куры также могут быть носителями возбудителя геморрагического колита [7].

Несмотря на некоторые успехи в понимании патогенеза ГК и ГУС, вызванных E.coli O157:Н7, тактика антибиотико- и химиотерапии больных, остается неопределенной и противоречивой. Так, по данным, представленным в [8], применение при ГК триметоприм-сульфаметоксазола не эффективно, поскольку не препятствует развитию у пациентов ГУС. Это согласуется с результатами работы других исследователей [9], показавших в экспериментах in vitro, что подпороговые концентрации препарата стимулируют продукцию клетками E.coli O157:Н7 веротоксина. Прямо противоположного мнения придерживаются авторы другого исследования [10], получившие положительные результаты применения триметоприм-сульфаметоксазола в клинике. На незначительный эффект при терапии больных ГК и ГУС триметоприм-сульфаметоксазолом указывается в сообщении [11], однако в этом случае лечение начато было только через семь дней после развития болезни. В целом же следует отметить, что исследования, посвященные оценке эффективности антибиотиков и химиопрепаратов в отношении E.coli O157:Н7 как в условиях in vivo, так и in vitro немногочисленны.

В отечественной литературе до настоящего времени отсутствовали оригинальные работы и сообщения об инфекции, обусловленной E.coli O157:Н7. Однако нельзя не согласиться с мнением В.А. Малова и С.Г. Пак [12], которые на основании клинических наблюдений предположили, что данная патология в России может иметь место, но остается не диагностируемой. В настоящей работе впервые представлены результаты исследований антибиотикочувствительности и некоторых других свойств штаммов E.coli O157:Н7 и O157:Н? (серотип не определен), выделенных на территории России при спорадических случаях ГК в 1996-1997 гг.

Материал и методы

В работе использовано 33 штамма E.coli O157, из которых: 4 штамма серотипа O157:Н7 и 12 штаммов O157 с не определенным серотипом изолированы от детей и лиц, пожилого возраста с ГК и синдромом ГУС в г. Тула и Тульской обл.; 2 штамма серотипа O157:Н7 получены из музея культур ГИСК им. Л.А. Тарасевича; 15 штаммов E.coli O157:Н7, выделенных во время вспышки ГК в Японии, любезно предоставлены нам г. Харуо Ватанабе, директором Департамента бактериологии Национального института здоровья, Токио. Штаммы хранятся в музее культур ГНЦ ПМ в лиофилизированном состоянии.

В экспериментах использовали антибактериальные препараты отечественного и зарубежного производства: ампициллин, стрептомицин, гентамицин, тетрациклин, метациклин, доксициклин, левомицетин (хлорамфеникол), рифампицин (Россия); оксолиниевая кислота (грамурин, "Chinoin", Венгрия), офлоксацин (таривид, "Bayer", Германия), ципрофлоксацин (ципролет, "Dr. Reddy`s Lab.", Индия), пефлоксацин (абактал, "Lek", Словения), имипенем/(циластатин) (тиенам, "Merch Sharp a.Dohme",, США), азтреонам (азактам, Bristol-Myers Squibb", США), цефуроксим (кетоцеф, "Pliva", Хорватия), цефотаксим (клафоран, "Roussel Uclaf", Франция), цефазолин, (кефзол, "Eli Lilly", Италия), цефтазидим (фортум, "Glaxo Wellcome", Великобритания), амикацин ("Sigma", США), бисептол ("Polfa", Польша).

Минимальные подавляющие концентрации (МПК) препаратов определяли методом двукратных серийных разведений на плотной питательной среде Antibiotic Test Agar ("Difco", США). Посевная доза составила 106 микр. клеток. Результаты учитывали через 24 ч после инкубации культур при 37њС.

Биохимические свойства культур определяли с помощью биохимической дифференцирующей системы для энтеробактерий производства НПО "Диагностические системы" (Россия) согласно прилагаемой методике.

Серотипирование штаммов осуществляли в реакции агглютинации со специфическими антисыворотками O157 и Н7, а также в реакции латексагглютинации со специфическими латексными диагностикумами, разработанными в ГНЦ ПМ. Использованная в работе Н7-коли-сыворотка была любезно предоставлена нам Н.М. Ландсман.

Колициногенность и гемолитическую активность штаммов определяли по общепринятым методикам [13].

Результаты и обсуждение

Результаты изучения биохимических и некоторых других свойств штаммов E.coli O157 представлены в табл. 1. Как следует из приведенных данных, культуры исследуемых штаммов утилизируют глюкозу, лактозу, мальтозу, арабинозу, маннит, цитрат натрия с глюкозой, не ферментируют сорбит, инозит, цитрат и малонат натрия. Не продуцируют сероводород и ацетилметилкарбинол. Не обладают $\beta$-галактозидазной, уреазной, аргининдегидролазной, фенилаланин-дезаминазной активностью, но имеют ферменты лизин- и в большинстве случаев орнитиндекарбоксилазу. По перечисленным свойствам анализируемые штаммы не отличаются от штаммов E.coli O157 различных серотипов, выделенных в Чехословакии [14]. В то же время нами выявлены штаммовые различия в отношении способности утилизировать сахарозу. Согласно результатам анализа около половины штаммов, выделенных в России и в Японии, не утилизируют сахарозу. Кроме этого часть штаммов, выделенных в России (группы III и IV), не имеют фермента орнитиндекарбоксилазы. Все исследованные штаммы неколициногенны и не обладают гемолитической активностью.

Таблица 1. Биохимические свойства штаммов E.coli серогруппы O157
Свойства штаммов E.coli O157:Н7 E.coli O157:Н?
I1) II III IV
Утилизация глюкозы + + + +
- " - лактозы + + + +
- " - маннита + + + +
- " - сахарозы + (46%)2) + + (50%) + (67%)
- " - инозита - - - -
- " - сорбита - - - -
- " - арабинозы + + + +
- " - мальтозы + + + +
- " - цитрата Na - - - -
- " - малоната Na - - - -
- " - цитрата Na с глюкозой + + + +
Наличие ферментов:
лизиндекарбоксилазы + + + +
орниминдекарбоксилазы + + + (50%) + (25%)
аргининдегидролазы - - - -
фенилаланиндезаминазы - - - -
уреазы - - - -
$\beta$-галактозидазы - - - -
Продукция сероводорода - - - -
- " - ацетилметилкарбинола - - - -
Kолициногенность - - - -
Гемолитическая активность - - - -
Реакция агглютинации с сыворотками:
O157 + + + +
H7 + + + -
Примечание: 1) - I - штаммы, выделенные в Японии; II - штаммы, полученные из ГИСК; III и IV - штаммы, выделенные в России.
2) - в процентах приведено количество штаммов, не обладающих данными свойствами.

Как видно из табл. 1, штаммы, входящие в I, II и III группы, дают положительную реакцию агглютинации и реакцию латексной агглютинации со специфическими O157 и Н7 коли-сыворотками и соответствующими латексными диагностикумами, что свидетельствует об их принадлежности к серотипу O157:Н7. Штаммы IV группы дают положительные реакции только с антителами к антигену O157, но не к Н7 антигену. Это обстоятельство, а также факт выделения их от больных с клиническими признаками ГК и ГУС позволяет предположить, что штаммы IV группы могут представлять новый серотип энтерогеморрагических эшерихий, что требует дальнейших исследований.

Далее...


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования