Rambler's Top100 Service
Поиск   
 
Обратите внимание!   Обратите внимание!
 
  Наука >> Медицина >> Эндокринология | Научные статьи
 Написать комментарий  Добавить новое сообщение
 См. также

Обзорные статьиПрогресс в изучении генетически детерминированных синдромов и болезней, характеризующихся нарушениями нервно-психического развития детей

Необычное проявление синдрома Клайнфелтера у мальчика 1,5 лет: молекулярно-цитогенетическая диагностика мозаичной формы полисомии хромосомы Х

В.О. Шаронин, С.Г. Ворсанова, Н.А. Белова, М.В. Прыткина, Ю.Б. Юров

Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ; Научный центр психического здоровья РАМН, Москва


Представлен необычный случай сочетания задержки психоречевого и психомоторного развития с микроаномалиями у мальчика 1,5 лет при мозаичном кариотипе, включающем 4 клона клеток с полисомией Х, в том числе и с синдромом Клайнфелтера. Показаны современные возможности молекулярно-цитогенетической диагностики сложной формы гоносомного мозаицизма.

Ключевые слова:

дети, синдром Клайнфелтера, полисомия Х, FISH-диагностика, мозаицизм.

Синдромы полисомии хромосомы Х у детей, по данным ряда авторов, встречаются с частотой 1:500 - 1:700 у мальчиков [1, 2]. Она может быть представлена ди-, три-, тетрасомией, а также мозаичным сочетанием клеточных линий (клонов), несущих различное число хромосом Х. Синдром Клайнфелтера является наиболее распространенной формой полисомии хромосомы Х у детей мужского пола. Многие авторы относят все разновидности анеуплоидий хромосомы Х к синдрому Клайнфелтера (кариотип 47,XXY) [2], популяционная частота которого - 0,5-2 на 1000 новорожденных мальчиков, включая полные и мозаичные формы [1, 3, 4]. Этот синдром встречается у 1-2,5% пациентов с легкой степенью умственной отсталости.

Известно, что в раннем возрасте диагностика синдрома Клайнфелтера затруднена из-за отсутствия четких клинических симптомов. У 15% больных с синдромом Клайнфелтера наблюдают олигофрению, обычно в степени дебильности, что не может считаться постоянным диагностическим критерием [2]. Чаще, чем в популяции, у детей с кариотипом 47,XXY встречаются речевые нарушения [1]. Для пациентов с синдромом Клайнфелтера характерны деформации ушных раковин, алопеция, катаракта, прогнатизм, поперечная ладонная складка, радиоульнарный синостоз, сколиоз, неврологические нарушения, пороки сердца, но эти признаки не имеют диагностического значения [4]. Основные клинические признаки синдрома проявляются в пубертатном возрасте, одним из них является гинекомастия, связанная с повышенной продукцией эстрогенов интерстициальными клетками Лейдига и обнаруживаемая у 1/4 больных [5]. Наружные половые органы обычно сформированы по мужскому типу и нередко имеют нормальные размеры. Микроорхизм является одним из важных клинических критериев синдрома.

Известно также, что добавочные хромосомы Х в мужском кариотипе (полисомия Х) ведут к грубой задержке психического развития и широкому спектру врожденных пороков и микроаномалий. Так, кариотип 49,XXXXY, например, приводит к комплексу резко выраженных нарушений: пренатальной гипотрофии, задержке роста, лицевым аномалиям (гипертелоризм, эпикант, косоглазие, близорукость, уплощение спинки носа, деформация ушных раковин, прогнатизм), клинодактилии мизинцев, плоскостопию, недоразвитию и видоизменению половых органов. Практически у всех больных выявляются гипогонадизм и крипторхизм. Отчетливо выражена дисгенезия гонад: отсутствие половых и гипоплазия интерстициальных клеток [2]. Больные с кариотипом 49,XXXXY страдают глубокой олигофренией: их IQ в среднем достигает лишь 40, тогда как соответствующий показатель в случаях классического типа синдрома Клайнфелтера с кариотипом 47,XXY может превышать 80-90 [1, 2]. К настоящему времени описано более 100 случаев данной патологии, причем в большинстве из них установлено материнское происхождение всех четырех хромосом Х.

Мозаичные формы заболевания характерны для синдромов, связанных с аномалиями половых хромосом, в том числе и для синдрома Клайнфелтера [6, 7]. Эти формы определяются присутствием в организме человека клона клеток, отличного от нормального набора хромосом (наличие в организме двух и более клеточных линий с разным числом и/или структурой хромосом). Мозаицизм встречается в виде численных аномалий (анеуплоидий) и структурных перестроек гоносом и аутосом, часто в сочетании с нормальным клоном клеток. В генетической практике встречаются кариотипы, представленные двумя или более аномальными клеточными линиями. Характеризуя клиническое проявление мозаичных форм аномалий гоносом, можно сказать, что при них наблюдается менее выраженная картина синдромов (forme fruste) [8].

В цитогенетической практике встречаются случаи с несколькими клеточными линиями - от 2 до 5. В настоящей работе представлен случай мозаичной формы синдрома Клайнфелтера и полисомии Х с присутствием четырех клеточных линий в кариотипе у мальчика с необычной клинической картиной.

Цитогенетическое исследование проведено на препаратах метафазных хромосом, которые получали из лимфоцитов периферической крови, культивируемых в условиях in vitro полумикрометодом в соответствии со стандартной процедурой [9].

Хромосомные препараты анализировали под световым микроскопом "Axiophot" при увеличении 1125 с применением дифференциального окрашивания хромосом по длине (GTG- и CBG-методы). Молекулярно-цитогенетическую диагностику проводили с использованием флюоресцентной гибридизации in situ (FISH-диагностика) с помощью ДНК-зонда, специфичного для хромосомы Х (pYAM10-40), меченного биотином [10-12]. Препараты с метафазными и интерфазными клетками анализировали под флюоресцентным микроскопом "Aristoplan" с соответствующим набором фильтров при увеличении 1125 по ранее описанному протоколу [10, 13].

Больной Андрей Б., 1,5 лет, от здоровых родителей: к моменту его рождения матери - 28 лет, отцу - 31 год. В анамнезе у матери 1 выкидыш в срок 10 нед беременности и 4 медицинских аборта. Мальчик родился от 6-й беременности в срок с массой тела 2300 г и длиной 47 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Из родильного дома был выписан с диагнозом гипотрофии. При поступлении в клинику боксированного отделения Московского НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ у ребенка отмечены выраженная задержка психоречевого и психомоторного развития, врожденная косолапость, миопия высокой степени, гипертелоризм глазных щелей, дисфункция хорд митрального клапана. Комплекс аномалий, выявленных у пациента, в целом соответствует клинике, характерной для больных с кариотипом 49,XXXXY. Речевые нарушения и аномалии сердечно-сосудистой системы характерны и для больных с синдромом Клайнфелтера. Однако отсутствие множественных врожденных пороков и микроаномалий развития может свидетельствовать о стертой клинической картине синдрома полисомии Х (forme fruste), обусловленной гоносомным мозаицизмом.

В результате проведенных цитогенетических исследований установлен кариотип 48,XXXY/49,XXXXY. Кариотипы родителей ребенка без особенностей. Согласно показаниям, разработанным в лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний, в подобных случаях проводится молекулярно-цитогенетический анализ с целью определения доли аномальных клеточных линий и уточнения цитогенетического диагноза [6, 13].

Проведение молекулярно-цитогенетического исследования с использованием хромосомо-Х-специфичной ДНК-пробы pYAM10-40 позволило выявить дополнительные к результатам цитогенетического исследования клеточные линии: с кариотипом 47,XXY (3%) и 50,XXXXXY (5%). Кроме того, с помощью интерфазного анализа большого числа клеток (более 1000) у ребенка обнаружена небольшая доля (0,2%) нормального мужского клона (кариотип 46,XY ). Метод молекулярного метафазного анализа был применен для верификации полученных с помощью интерфазного FISH-анализа данных. Ранее уже была показана возможность определения анеуплоидий в интерфазах при сравнении с метафазными клетками [13]. В настоящем исследовании на большой популяции клеток (1000 метафаз и 1000 интерфаз) подтверждена возможность определения числа хромосом на интерфазных ядрах. В этой части исследования по числу клеток с различным количеством сигналов определяли содержание мозаичного клона: обнаруженное число сигналов в интерфазных клетках сравнивали с результатом мечения на метафазном препарате. Сравнение проводили с использованием фи-преобразования частот. Подсчет интерфазных ядер с различным числом сигналов дал возможность сравнить соотношение мозаичных линий и достоверно определить доли клонов, обнаруженных в метафазных и интерфазных клетках.

На рис. 1 показан кариотип одного из клонов клеток ребенка с 4 хромосомами Х. Клиническое обследование больного, цитогенетическая и молекулярно-цитогенетическая диагностика позволили установить мозаичную форму полисомии Х с участием клеточной линии синдрома Клайнфелтера. Стертая клиническая картина с признаками синдрома Клайнфелтера и полисомии Х обусловлена гоносомным мозаицизмом. Другие симптомы этих синдромов могут развиться у ребенка в дальнейшем, поэтому необходимо наблюдение больного в динамике.

Рисунок 1. Кариотип одного из клонов клеток ребенка.

Результаты FISH-диагностики с использованием хромосомо-Х-специфичного ДНК зонда (pYAM10-40), меченного биотином.

Таким образом, с помощью цитогенетического и молекулярно-цитогенетического методов исследования у мальчика выявлен сложный мозаицизм с присутствием 4-клеточных линий, что соответствует как синдрому Клайнфелтера, так и другим формам полисомии Х. Подобный сложный диагноз возможно установить при использовании молекулярно-цитогенетической диагностики (FISH-метода) с применением хромосомоспецифичных ДНК-проб. Корректный цитогенетический диагноз при определении доли аномальных клеточных клонов в кариотипе больного способствует повышению уровня генетического консультирования в семье, а также эффективной профилактике хромосомной патологии [15].

Российский вестник перинатологии и педиатрии, N5-2000, с.47-49

Литература

1. Abramsky L., Chapple J. 47,XXY (Klinеfelter syndrome) and 47,XYY: estimated rates of and indication for postnatal diagnosis with implications for prenatal counselling. Prenat Diagn 1997; 17: 4: 363-368.

2. Schinzel A. Catalogue of unbalanced chromosome aberrations in man. Berlin, New York, de Gruyter 1983; 295.

3. Лазюк Г.И. Тератология человека. М: Медицина 1991; 480.

4. Козлова С.И., Демикова Н.С., Семанова Е., Блинникова О.Е. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование. М: Практика 1996; 410.

5. Bandmanny H.-J., Breit R., Perwein E. Klinefelter's syndrome. Springer Verlay, Berlin, Heidelbery, New York, Tokyo 1984; 320.

6. Ворсанов С.Г., Юров Ю.Б., Александров И.А. и др. Молекулярно-цитогенетическая диагностика наследственных болезней, связанных с различными аномалиями хромосом Х. Педиатрия 1989; 1: 78-80.

7. Micic M. Utricaj aberatija polnih hromozoma na fretilitet muskaraca. Arch Urol 1992; 35-36: 133-136.

8. Берешева А.К. Роль молекулярно-цитогенетической диагностики в генетическом консультировании супружеских пар с нарушением репродуктивной функции: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Харьков 1995; 17.

9. Hungerford D.A. Leukocytes culture from small inocula of whole blood and preparation of metaphase chromosomes by treatment with hypotonic KCI. Stain Technol 1965; 40: 333-338.

10. Soloviev I.V., Yurov Y.B., Ioannou I. et al. Identification and molecular-cytogenetic characterization of large subset of human plasmids, cosmids, PAC and YAC clones: the search of DNA probes for pre-and postnatal diagnosis. Cesko-Slovenska pediatrie 1997; 7: 529- 538.

11. Soloviev I.V., Yurov Y.B., Vorsanova S.G., Malet P. Microwave activation of fluorescence in sity hybridization: a novel method for rapid chromosome detection and analysis. Focus 1994; 16: 4: 115-116.

12. Yurov Y.B., Soloviev I.V., Vorsanova S.G. et al. DNA probes for pre-and postnatal diagnosis of chromosomal anomalies: a collection for FISH analysis. Cesko-Slovenska pediatrie 1997; 7: 550-554.

13. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Дерягин Г.В. и др. К методике диагностики анеуплоидий при помощи гибридизации in situ: анализ интерфазных ядер. Бюл эксперим биол мед 1991; 10: 413- 415.

14. ISCN 1995. An international system for human cytogenetic nomenclature. F. Mitelman, S. Karger (ed.). Basel 1995; 115.

15. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Соловьев И.В. и др. Современные достижения молекулярной цитогенетики в диагностике хромосомной патологии у детей. Рос вестн перинатол и педиатрии 1998; 43: 1: 31-36.


Написать комментарий
 Copyright © 2000-2015, РОО "Мир Науки и Культуры". ISSN 1684-9876 Rambler's Top100 Яндекс цитирования